一抗和二抗的區別
日期：2023-07-26 09:34:41
一抗和二抗有什么區別?這是實驗室新手經常問的問題。本文將從結合能力、用途和標簽、來源、克隆性和預吸附五個方面回答這個問題。
1. 結合能力
抗體(Ab)廣泛用于研究。根據它們的結合能力，抗體可分為兩類：一抗和二抗。具體來說，一抗是結合蛋白質或抗原(Ag)或任何你研究的物質的抗體，而二抗是與一抗結合的抗體。請看下面的圖1:
圖1. 一抗與二抗
如果您已經閱讀了我們之前的文章《什么是抗體？》，您會對抗體的結構有了很好的了解，然后您會發現更容易理解初級抗體的Fab結構域與抗原結合，暴露其Fc結構域以供次級抗體結合，因此次級抗體的Fab結構域會與初級抗體的Fc結構域結合。
由于在同一物種中，同類別抗體的Fc結構域是相同的，所以一種類型的次級抗體可以結合多種類型的初級抗體。例如，當以小鼠產生的IgG類別的抗體作為初級抗體時，可以使用一種針對小鼠IgG Fc結構域的抗體作為次級抗體，而該次級抗體則不是由小鼠產生的。
2. 用途和標記方式
在免疫分析中，通常需要使用一抗與目標抗原結合，但不一定需要使用輔助抗體。以直接ELISA和間接ELISA為例進行說明。直接ELISA采用直接標記的方式，也就是將一抗直接標記上酶用于酶反應和信號檢測，因此不需要使用輔助抗體。而間接ELISA不直接標記一抗，而是將輔助抗體標記上酶，如圖2所示：
圖2. 直接ELISA與間接ELISA
選擇對一抗進行直接標記還是對輔助抗體進行間接標記取決于你的實驗需求。直接標記和間接標記各有優缺點。直接標記通常具有簡單的操作步驟，節省時間和試劑的優勢，沒有來自輔助抗體的交叉反應的風險，但缺乏信號放大和靈活性，可能導致較高的背景信號。間接標記則可以實現信號的放大，同一種輔助抗體可以與多個一抗結合，具有較高的靈活性，但操作步驟相對復雜，存在交叉反應的風險。
3. 來源
抗體的來源是需要考慮的重要因素。一抗的宿主物種應與樣品的物種不同，以避免輔助抗體與樣品中的免疫球蛋白發生交叉反應。此外，輔助抗體的宿主物種應與一抗的宿主物種不同，因為輔助抗體應針對一抗的宿主物種。
例如，如果你研究的是小鼠樣品，你將需要一種不同于小鼠的動物生成的一抗，比如兔子生成的一抗。然后，如果你使用針對小鼠的兔子抗體作為一抗，你將需要一種不同于兔子的動物生成的輔助抗體，比如山羊生成的輔助抗體。
為了能夠檢測目標抗原，輔助抗體不僅應具有對一抗宿主物種的特異性，還應具有對一抗的同種型的特異性。例如，如果一抗是兔子生成的IgG1抗體，你將需要一種可以與兔子IgG1抗體發生反應且不是由兔子生成的輔助抗體。
4. 單克隆
一抗可以是單克隆抗體（mAb）或多克隆抗體（pAb）。
讓我們首先比較一下單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體只能識別抗原上的一個表位，而多克隆抗體可以識別抗原上的多個表位。由于這個原因，單克隆抗體和多克隆抗體具有不同的特性和用途。單克隆抗體具有高特異性和高重復性，與多克隆抗體相比，在染色中產生的背景噪音較少。然而，由于其高特異性，當目標表位受到抗原的化學處理而改變時，單克隆抗體可能無法起作用。相比之下，多克隆抗體具有高親和力，對抗原的微小變化具有耐受性，并且可以實現更可靠的檢測。但是，多克隆抗體的不同批次之間存在更大的變異性，并且更容易在染色中產生較高的背景噪音。
如果您的實驗需要高特異性，使用單克隆抗體作為一抗可能是一個不錯的選擇。如果陽性信號較弱，可以嘗試使用多克隆抗體。由于多克隆抗體可以識別多個表位，它們在免疫沉淀（IP）和染色質免疫沉淀（ChIP）等實驗中更有可能獲得更好的結果。但是，如果您想探測抗原的特定結構域，多克隆抗體就不適用了，此時單克隆抗體作為一抗可能更好。
二抗可以是單克隆抗體或多克隆抗體，它與一抗或其片段結合。二抗有不同的形式。首先，二抗可以針對一抗的整個分子。例如，一抗通常是IgG同種型。那么，您將需要一種針對IgG H＆L（重鏈和輕鏈）的抗體作為二抗，它與主要IgG抗體的重鏈和輕鏈都反應。此外，這種抗IgG H＆L抗體還與一抗所屬物種的其他免疫球蛋白類別（如IgM和IgA）反應，因為同一物種中的所有免疫球蛋白都具有相同的輕鏈。
5. 預吸附
二抗有時需要進行額外的純化過程，稱為預吸附，以增加特異性并減少非特異性結合。在預吸附過程中，含有二抗的溶液通過含有固定血清蛋白或潛在交叉反應物種（如樣品的物種）的柱狀基質。通過這個過程，溶液中的非特異性抗體將被去除，而高度特異性的二抗將被保留下來。例如，如果您正在使用小鼠組織進行研究，可以選擇已經吸附有小鼠血清或小鼠IgG的二抗。
預吸附的二抗產生較少的非特異性結合，因此不太可能產生非特異性背景。當您在多標記實驗中確定蛋白質表達，或者研究免疫球蛋白豐富的組織或細胞時，建議您使用預吸附的二抗。
總之，一抗和二抗之間存在幾個區別。首先，一抗和二抗具有不同的結合能力。一抗與檢測的抗原結合，而二抗與一抗結合，通常是它們的Fc區域。其次，在免疫分析中始終需要一抗，而二抗不一定需要，這取決于實驗方法（直接或間接標記）。第三，生成一抗的物種與樣品的物種不同，生成二抗的物種也與一抗的來源物種不同。第四，一抗和二抗都可以是單克隆或多克隆抗體，但在選擇其克隆性時需要考慮不同的因素。最后，二抗有時需要進行預吸附，而一抗通常沒有這種需求。
現在，您可能對一抗和二抗之間的區別有了更好的理解，并且將更容易選擇適合您實驗的正確抗體。選擇合適的抗體從來都不是一項簡單的任務。如果您選擇了不適合您實驗的抗體，可能會浪費金錢、時間和寶貴的樣品。為了簡化抗體的選擇，您可以繼續閱讀我們網站上的另一篇文章：《如何選擇合適的抗體？》
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