質(zhì)粒DNA大量抽提試劑盒
產(chǎn)品介紹
質(zhì)粒DNA大量抽提技術(shù)在分子生物學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用。從基礎(chǔ)研究到藥物開(kāi)發(fā)，從基因功能研究到疾病治療，質(zhì)粒DNA的大量制備都是不可或缺的一環(huán)。通過(guò)質(zhì)粒DNA的大量抽提，可以獲得足夠用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的質(zhì)粒，從而進(jìn)行深入的分子分析和功能研究。
華美生物的質(zhì)粒DNA大量抽提試劑盒采用了SDS-堿裂解法來(lái)破碎菌體，得到裂解液后，通過(guò)加入特殊設(shè)計(jì)的內(nèi)毒素清除劑，有效去除了其中的內(nèi)毒素。在特定的條件下，質(zhì)粒DNA樣品在重力作用下流經(jīng)純化柱時(shí)，會(huì)與柱子緊密結(jié)合。進(jìn)一步的處理后，質(zhì)粒DNA可以被充分洗脫下來(lái)。最后，通過(guò)異丙醇沉淀的方法，實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒DNA的濃縮純化，極大地提高了純化的效率。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
- 適用于大量抽提：本試劑盒設(shè)計(jì)用于抽提150 ~ 300 mL大腸桿菌質(zhì)粒，適合大量質(zhì)粒DNA的提取。
- 內(nèi)毒素清除：獨(dú)特的內(nèi)毒素清除劑能有效去除內(nèi)毒素，保證質(zhì)粒DNA的純度和安全性。
- 高純度：三步過(guò)柱純化，使質(zhì)粒DNA純度提高，內(nèi)毒素含量極低，可滿足細(xì)胞轉(zhuǎn)染級(jí)要求。
- 高結(jié)合能力：每個(gè)質(zhì)粒純化柱的質(zhì)粒 DNA 最大結(jié)合能力達(dá)到1.5mg，提高了純化效率。
- 無(wú)需有毒試劑：整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程不使用苯酚、氯仿等有毒試劑，降低了對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的危害。
產(chǎn)品應(yīng)用：
提取的質(zhì)粒 DNA 適用于各種應(yīng)用，包括限制性酶消化、PCR、測(cè)序、連接以及各種細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)染。
產(chǎn)品詳情
操作流程
驗(yàn)證數(shù)據(jù)
樣品上樣量：1 μg
產(chǎn)品組分
| 試劑名稱 | 5次 |
|---|---|
| Buffer S1 | 60 mL |
| Buffer S2 | 60 mL |
| Buffer S3 | 60 mL |
| RNase A | 18 mg |
| Wash Buffer | 100 mL*2 |
| ER Buffer | 18 mL |
| Elution Buffer | 60 mL |
| TE Buffer | 5 mL |
| Plasmid Purification MaxiPrep Column | 5根 |
產(chǎn)品保存
RNase：-20°C；
其他組分：15-25°C。
常見(jiàn)問(wèn)題與解答
Q：質(zhì)粒裂解過(guò)程中，溶液S2加完呈現(xiàn)什么狀態(tài)是正常的？
A：S2加完后，溶液變?yōu)榈S色的澄清狀態(tài)，質(zhì)地略粘稠，打開(kāi)蓋子時(shí)略有拉絲。
Q：質(zhì)粒中和過(guò)程中，溶液S3加完呈現(xiàn)什么狀態(tài)是正常的？
A：S3加完后，溶液出現(xiàn)白色蛋花狀沉淀，此時(shí)需要觀察是否還存在P2溶液加完后的粘稠狀團(tuán)塊，如果存在則需要加大幅度混合均勻。
Q：S2溶液在秋冬為什么會(huì)析出白色絮狀沉淀？
A：S2溶液的成分是SDS和NaOH，其中的SDS在低溫時(shí)容易結(jié)晶析出，在使用前需要提前30-60min放入37℃烘箱或者水浴鍋，直至試劑重新恢復(fù)澄清透明即可使用。
Q：如果質(zhì)粒上清離心完還略微渾濁怎么辦？
A：如果是批量出現(xiàn)該問(wèn)題，可以考慮離心時(shí)間是否過(guò)短，可以適量增加離心時(shí)間看看；如果是個(gè)別樣品渾濁，可以分裝到EP管內(nèi)重新離心3-5min，再吸取上清過(guò)濾，個(gè)別上清液肉眼看是澄清的，但是過(guò)濾時(shí)非常堵塞，也可以重新離心后再過(guò)濾。
Q：如果質(zhì)粒跑膠時(shí)有RNA殘留怎么辦？
A：如果是批量的有RNA殘留，可以適當(dāng)降低異丙醇的量，正常情況異丙醇的量是洗脫液的70%，但是異丙醇過(guò)多會(huì)吸附過(guò)多的DNA和RNA片段，具體用量可以根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)情況調(diào)整；此外還可能是RNA酶失活，在第一步重懸菌體的時(shí)候RNA并沒(méi)有消化完全。
