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單抗、多抗、重組抗體應如何選擇

日期:2023-07-26 09:26:17

隨著生命科學的快速發展,針對蛋白質的研究日益增多,突顯了抗體在實驗中的重要作用。面對多樣且復雜的抗體試劑市場,選擇適合實驗的抗體尤為重要。在準備購買抗體時,需要考慮許多因素。例如,實驗的目的是什么,這種抗體能否在預期的實驗應用中使用?這種抗體是否適用于實驗中的細胞或組織?

如果您研究的是針對同一目標的單克隆、多克隆或重組抗體,應該如何選擇?它們之間有什么區別?是否有一種比其他種類更好,或者它們都是為不同的目的而設計的?這些問題很復雜,但絕對值得探討。

在本文中,我們將重點介紹這三種抗體及其之間的差異。


1. 多克隆抗體

多克隆抗體(pAbs)是由體內不同B細胞譜系產生的異質混合物,可以識別同一抗原中的多個不同表位。多克隆抗體的生產通常包括收集免疫動物的血液,分離免疫球蛋白,并進行親和純化以去除非特異性抗體 [1]。多克隆抗體的生產最常在兔子中進行,但也可以在有蹄類動物(綿羊、山羊、馬、豬等)、嚙齒類動物和雞等動物中進行 [2]。與其他物種相比,兔子更容易且成本較低,能對包括小分子和帶有或不帶有翻譯后修飾的多肽在內的各種抗原產生強烈的免疫應答。從兔子獲取血液也相對容易。

多克隆抗體具有較弱的特異性、較強的親和力和較高的敏感性,但容易發生非特異性染色。因此,多克隆抗體特別適用于檢測或捕獲低豐度抗原。如果表達量不清楚,并且存在經濟和時間限制,也可以選擇多克隆抗體。多克隆抗體通常用作免疫分析中的二抗,包括ELISA、Western blot和免疫組織化學。在ELISA中,一抗(單克隆抗體)與目標抗原結合,而HRP偶聯的二抗(多克隆抗體)用于結合一抗,放大信號從而提高檢測效果 [3]。由于相對于單克隆抗體而言,多克隆抗體具有更高的敏感性,因此它們特別適用于癌癥或免疫性疾病標記物的早期檢測 [4]。由于多克隆抗體通常包含針對某一特定抗原的不同表位,包括對變性抗原具有抗體結合能力的表位,因此它們在深層固定的樣本中也能很好地工作。多克隆抗體最常用于石蠟包埋組織切片的染色。此外,在農業生產中,多克隆抗體還用于現場監測農藥殘留。


2. 單克隆抗體

單克隆抗體是來源于單個B細胞克隆的同種抗體,能夠檢測抗原中的單個表位。所有單克隆抗體最初都是多克隆抗體混合物,但通過選擇或克隆過程進行分離,以鑒定和擴大所需的單價克隆。單克隆抗體通常是從嚙齒類動物、兔子和駱駝等宿主中產生,并根據所需抗體類型采用各種方法進行生產。

傳統上,單克隆抗體的生產包括用目標蛋白免疫宿主動物,提取能識別和響應抗原的B細胞,然后將B細胞與骨髓瘤細胞融合,形成穩定的雜交瘤細胞,可持續產生目標抗體,最后在細胞培養上清液或小鼠腹水中培養雜交瘤細胞系。由K?hler和Milstein首次提出的雜交瘤技術 [5] 需要進行免疫以產生抗體,并受到個體健康狀況、免疫狀態等因素的影響,導致所產生的抗體一致性和重復性較差。此外,動物衍生的抗體常常會引起患者的免疫反應,限制了它們作為臨床治療的應用。

單克隆抗體具有較強的特異性,但親和力和敏感性較低。它們適用于檢測相對高表達水平的抗原。由于單克隆抗體能夠結合細胞特異性抗原并靶向這些細胞以消除或中和其對機體可能產生的任何有害效應,它們已成為癌癥 [6] [7]、各種自身免疫性疾病和其他疾病的有效治療方法。單克隆抗體廣泛用于生物醫學研究和醫學領域,用于治療、診斷和研究疾病,以及開發和測試新藥。美國食品和藥物管理局(FDA)已批準多種單克隆抗體用于治療,并有數百種正在進行各個階段的臨床試驗。

單克隆抗體可用于分析抗原的精細結構和測試抗原與抗體之間的未知結構關系。針對復雜生物混合物中特定分子的抗體可以用于分離、分析和純化特定的分子抗原。單克隆抗體試劑可用于臨床診斷和治療,包括抗體-藥物偶聯物 [8] 和針對新興傳染病的疫苗 [9]

單克隆抗體和多克隆抗體的主要區別

圖1. 單克隆抗體和多克隆抗體的主要區別


3. 重組抗體

重組抗體,也稱為基因工程抗體,是利用基因重組技術制備的抗體。將抗體基因克隆到表達載體中,然后轉染到適合的宿主細胞系中進行抗體表達。重組抗體使得制備人源化抗體和全人源抗體成為可能。哺乳動物細胞系是制備重組抗體最常用的方法,也可以使用細菌、酵母或昆蟲來源的細胞系。

與單克隆抗體相比,重組抗體可以在無需免疫的情況下穩定大規模生產。避免了由小鼠來源抗體引起的人體免疫反應。重要的是,重組抗體具有良好的一致性、高重復性和較好的再現性。更多的基因組合可以進行重組,包括抗體片段表達、亞型替代、嵌合抗體、抗體人源化等。重組抗體存在多種形式,從IgG到scFv、Fab或VHH片段,以及雙特異性和三特異性變體 [10]。根據治療需求可以制備新的抗體。由于穩定轉染篩選出穩定的細胞系進行體外表達,重組抗體適用于單克隆抗體藥物的快速工業化生產。較小的分子量使重組抗體具有更強的穿透能力,因此更容易到達病變的核心部位。重組抗體可以通過原核細胞、真核細胞或植物表達系統大規模生產,大大降低了生產成本。


4. 多克隆抗體、單克隆抗體和重組抗體的優缺點

隨著抗體制備技術的快速發展,多克隆抗體、單克隆抗體和重組抗體相繼出現。每種抗體都有其獨特的優點,也有不可避免的缺點。因此,一些實驗將幾種抗體串聯起來,利用它們各自的優勢來獲得更好的實驗結果。下表列出了三種抗體在不同方面的優缺點。

多克隆抗體 單克隆抗體 重組抗體
重復性 較低 高;批次間差異小 更高;高純度,批次間差異小
特異性 更強
生產周期 2到3個月的開發和生產周期 4到6個月的開發周期;4到6周的生產周期 4個月的開發周期;1到6周的生產周期
動物免疫
亞型切換 困難 困難 方便
表達系統 常見的哺乳動物細胞(兔子、綿羊、山羊等) 小鼠腹水法、細胞培養上清法和重組抗體表達系統 常見的哺乳動物細胞系,也可以在特殊工程改造的細胞系(酵母、細菌、昆蟲和轉基因植物)中表達
成本 相對較低 生產昂貴;需要更多專業人員操作 需要技術專長和大量的時間和金錢投入來生產
人類免疫反應 不可避免 不可避免 可避免

當你準備購買抗體時,除了考慮抗體類型、宿主來源、純度、免疫原、反應物種、標記物、實驗驗證應用和支持數據外,還有一些必要的參考因素。合適的抗體可以幫助你獲得理想的實驗結果。

How to choose a commercial antibody

圖2. How to choose a commercial antibody


參考文獻:

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