ROR1藥物研發熱潮：默沙東與石藥集團的臨床試驗新動態
日期：2024-12-03 10:56:00
在腫瘤治療領域，ROR1已成為一個備受矚目的靶點，全球多家制藥企業正積極推進ROR1新藥進入臨床試驗階段。近期，默沙東以27.5億美元收購獲得的新藥Zilovertamab vedotin（MK-2140）臨床試驗申請再次獲得受理，該藥物由人源化單克隆抗體UC-961與微管抑制劑MMAE通過蛋白水解可切割的連接子偶聯而成，能夠精準靶向ROR1陽性腫瘤細胞并釋放細胞毒性藥物，有效抑制腫瘤生長。MK-2140在治療血液系統惡性腫瘤的臨床試驗中已展現出積極的療效和生存期改善。石藥集團的ROR1 ADC藥物SYS6005，其臨床試驗申請已獲得中國國家藥監局藥品審評中心（CDE）的受理，標志著該藥物有望用于治療晚期實體瘤患者。SYS6005通過與腫瘤細胞表面的ROR1受體結合，利用細胞內吞機制進入細胞內部，并在溶酶體內釋放毒素以殺傷腫瘤細胞。這些不僅表明ROR1靶向藥物的研究熱度，更顯示了ROR1在腫瘤治療中的重要潛力。目前，ROR1靶點藥物因其在臨床試驗中的初步成功而備受期待，預示著未來可能為癌癥患者帶來新的治療選擇 [1-2]。
1. 什么是ROR1？
ROR1是受體酪氨酸激酶樣孤兒受體（ROR）家族成員之一，屬于I型受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase, RTK)家族。與核受體中的ROR家族不同，ROR是一類膜受體。它們與家族中的原肌球蛋白激酶受體家族(tropomyosin-related kinase, Trk)、骨骼肌特異性酪氧酸激酶樣受體家族(muscle specific knase, MuSK)和神經營養因子酯氨酸激酶受體家族(neurotrophic tyrosine kinase receptor, NT-RTK)關系密切，由于ROR蛋白最初發現時配體未知，所以被定義為孤兒受體 [3]。
ROR家族的另一個成員是ROR2，ROR1與ROR2氨基酸序列的同源性達58%。其中ROR1又含有2種亞型：完整的細胞膜受體型ROR1以及截短型變異體。截斷型變異體主要分為無胞外結構的膜結合型ROR1I與只含胞外結構的可溶型ROR1 [4]。可溶型ROR1的表達在正常人與腫瘤患者中并無差異，血清中的表達量很低或者檢測不到，且與疾病的進展和嚴重程度無關，而完整結構的膜結合型ROR1在多種腫瘤組織特異性高水平表達 [5]。后文中所提到的ROR1都是指完整結構的膜結合型ROR1。
2. ROR1的結構與功能
ROR1是一種跨膜受體酪氨酸激酶蛋白。ROR1編碼基因共2814bp，位于染色體1p31.3。ROR1膜蛋白由937個氨基酸組成，分子量約105 kDa。ROR1結構在生物種間高度保守，如人與鼠的ROR1氨基酸序列同源性可達97%。如圖1所示，人源ROR1由一個胞外的免疫球蛋白樣結構域(Ig)、兩個富含半胱氨酸的結構域(FZD)、近膜kringle結構域、單次跨膜結構以及一個胞內酪氨酸激酶結構域（TKD）、兩個絲/蘇氨酸富集結構域(S/TRD)和一個脯氨酸富集結構域（PRD）組成 [6]。
圖1. The structure of ROR1
*圖片參考文獻發表在Protein Cell上[6]。
免疫球蛋白樣結構域和半胱氨酸富集結構域與ROR1結合配體的功能相關。其中FZD結構域由10個保守的半胱氨酸殘基和5個相應的二硫鍵組成。FZD結構還見于平滑肌家族受體（如Smo）、卷曲家族受體（如sFRP）、金屬羧肽酶Z（CPZ）、collagen α1 XVIII和低密度脂蛋白受體相關蛋白 (LRP)。這些蛋白大都可以結合Wnt蛋白并參與Wnt通路的信號轉導。目前大量研究己經證實ROR1也是通過FZD結合Wnt5a并激活非經典Wnt信號通路 [7] [8]。 Kringle結構域在ROR家族中比較保守，由80個氨基酸組成 [9]。其結構特點是含有三個由二硫鍵形成的環狀結構，這三個環狀結構也參與了ROR受體識別Wnt蛋白的過程。
ROR的酪氨酸激酶結構域在生物體高度保守，和Trk、MuSK的酪氨酸激酶結構域極其相似。但ROR1蛋白在這段高度保守的區域內存在某些氨基酸序列的改變,提示其胞內激酶活性有可能發生改變。絲/蘇氨酸、脯氨酸富集結構域是由絲/蘇氨酸富集結構域、脯氨酸富集結構域、絲/蘇氨酸富集結構域三個結構域串聯而成。該區域存在潛在的磷酸化位點、與下游信號傳導有關。
3. Wnt5a/ROR1與腫瘤
目前關于ROR1信號傳導的主流說法是，ROR1可通過介導非經典Wnt信號通路（non-canonical Wnt pathways）的信號傳遞，在多種生理過程中發揮重要作用，其中包括調節細胞分裂、增殖、遷移、和細胞趨化，尤其是Wnt5a。Wnt5a是典型的非經典Wnt信號通路的激活因子，參與NF-κB亞基p65的磷酸化，激活腫瘤細胞中NF-κB通路，促進細胞遷移和侵襲，EMT、癌轉移等。接下來，我們具體了解下ROR1是如何通過Wnt5a信號通路激活腫瘤細胞的。
Wnt5a/ROR1在多種癌癥中的高度表達。作為Wnt5a的受體，ROR1參與激活腫瘤細胞NF-κB通路。NF-κB通路是炎癥反應和免疫調控的掌舵者，在多種腫瘤類型中組成性激活。如圖2所示，Wnt5a激活受體ROR1或FZD5，導致Dvl2/3激活和Akt磷酸化。Akt繼而促進IKKα磷酸化激活IKK復合體，IKK復合體負責IκBα降解和NF-κB亞基p65的磷酸化。磷酸化的p65轉移到細胞核促進包括Wnt5a在內的靶基因轉錄表達。Wnt5a的分泌又促進新一輪的自主反饋循環。自主反饋循環ROR1/Akt/p65通路的激活會進一步促進促炎因子（如IL-6）和趨化因子（如CCL2）的分泌。
圖2. The diagram of Wnt5a/ROR1 signaling
此外，有多項研究已將ROR1的表達與YAP / TAZ轉錄的激活相關聯，從而增強腫瘤發生和化學耐藥性 [10] [11]。如圖3所示，Wnt5a與ROR1 / FZD復合物的結合，然后通過結合Gα12/13進一步激活RhoA，從而抑制Lats1/2活性，進而導致YAP / TAZ去磷酸化和核易位。易位到細胞核里的YAP/TAZ與TEAD結合后可以誘導涉及細胞增殖、干細胞自我更新和腫瘤發生基因的轉錄。增加的YAP/TAZ轉錄反過來又可以上調ROR1表達。
圖3. Crosstalk between Wnt5a-ROR1 signaling and YAP/TAZ pathway
*圖片參考文獻發表在Cells上[12]。
4. 靶向ROR1的臨床意義
ROR1靶向藥物的研究正在迅速發展，高達90多款臨床藥物在研，涉及多種藥物類型和治療機制，主要包括CAR-T細胞療法、ADC藥物、單克隆抗體等。
CAR-T藥物：以ONCT - 808和JCAR 024為例，通過基因工程技術對患者自身的T細胞進行改造，使其表面表達能夠特異性識別ROR1的嵌合抗原受體（CAR）。當回輸到患者體內后，這些CAR - T細胞能夠精準識別并結合腫瘤細胞表面的ROR1，從而激活T細胞的殺傷功能，直接對腫瘤細胞發動免疫攻擊，引發腫瘤細胞凋亡。
ADC藥物：如MK - 2140這類ADC藥物，由靶向ROR1的人源化IgG1單克隆抗體、可裂解連接子以及毒性載荷（如單甲基澳瑞他汀E，MMAE）組成。藥物首先通過抗體部分與腫瘤細胞表面的ROR1特異性結合，隨后被腫瘤細胞內吞進入細胞內部。在細胞內，連接子在特定酶的作用下發生裂解，釋放出毒性載荷MMAE，MMAE作為微管蛋白抑制劑，可干擾腫瘤細胞的微管功能，進而抑制細胞有絲分裂，最終導致腫瘤細胞死亡。
單抗藥物：如ZILO-301（Zilovertamab）是一種人源化單克隆抗體，特異性地靶向ROR1。它能夠精確地識別并結合腫瘤細胞表面的ROR1受體。這種結合可能會觸發機體自身的免疫反應。比如，激活補體系統，誘導補體依賴的細胞毒性（CDC）作用，或者通過抗體依賴的細胞介導的細胞毒性（ADCC）機制，使免疫細胞（如自然殺傷細胞等）識別并殺傷腫瘤細胞。
這些藥物主要針對ROR1在腫瘤細胞中的異常高表達，涵蓋了血液系統惡性腫瘤（如白血病、淋巴瘤等）以及實體瘤（如乳腺癌、肺癌、結直腸癌等），有望為不同類型腫瘤患者提供新的治療策略。多家機構，包括Oncternal Therapeutics、默沙東、勃林格殷格翰等，正在積極推動這些藥物的研發，最高階段已處于臨床3期，預示著ROR1靶向藥物有望在不久的未來上市，為腫瘤精準治療帶來重大突破，為癌癥患者提供新的治療選擇。
臨床研究表部分展示：
| 藥物 | 靶點 | 藥物類型 | 在研適應癥（疾病名） | 在研機構 | 最高研發階段 |
|---|---|---|---|---|---|
| Zilovertamab | ROR1 | 單克隆抗體 | 套細胞淋巴瘤 | 慢性淋巴細胞白血病 | University of California San Diego | University of California | Oncternal Therapeutics, Inc. | 臨床3期 |
| Zilovertamab vedotin | ROR1 x Tubulin | ADC | 彌漫性大B細胞淋巴瘤 | 復發性彌漫性大B細胞淋巴瘤 | B細胞淋巴瘤 | B細胞惡性腫瘤 | 慢性淋巴細胞白血病 | 濾泡性淋巴瘤 | 套細胞淋巴瘤 | 難治性彌漫性大 B 細胞淋巴瘤 | 播散性彌漫性大 B 細胞淋巴瘤 | 膀胱癌 | 伯基特淋巴瘤 | 尤文肉瘤 | 神經母細胞瘤 | 前體B細胞急性淋巴細胞白血病 | 實體瘤 | 急性淋巴細胞白血病 | 急性髓性白血病 | 邊緣區B細胞淋巴瘤 | T細胞淋巴瘤 | 巨球蛋白血癥 | Merck Sharp & Dohme Corp. | 默沙東研發（中國）有限公司 | Merck Sharp & Dohme LLC | Merck & Co., Inc. | 臨床2/3期 |
| CAR T-cell therapy(Peking University) | ROR1 | 自體CAR-T | 晚期惡性實體瘤 | 中國人民解放軍聯勤保障部隊第九二〇醫院 | 北京大學 | 臨床1/2期 |
| ROR1 CAR-T (Oncternal Therapeutics) | ROR1 | 自體CAR-T | 非霍奇金淋巴瘤 | 血液腫瘤 | 實體瘤 | Oncternal Therapeutics, Inc. | 臨床1/2期 |
| EMB-07 | CD3 x ROR1 | 雙特異性T細胞結合器 | 難治性淋巴瘤 | 肺腺癌 | 膀胱癌 | 乳腺癌 | 子宮癌 | 岸邁生物科技（蘇州）有限公司 | 臨床1期 |
| HDM-2005 | ROR1 | ADC | 難治性淋巴瘤 | 晚期惡性實體瘤 | 杭州中美華東制藥有限公司 | 臨床1期 |
| JCAR-024 | ROR1 | 自體CAR-T | 血液腫瘤 | 中美上海施貴寶制藥有限公司 | 臨床1期 |
| LCB-71 | ROR1 | ADC | 急性淋巴細胞白血病 | LigaChem Biosciences, Inc. | ABL Bio, Inc. | 無錫藥明合聯生物技術有限公司 | 基石藥業（蘇州）有限公司 | 臨床1期 |
| LYL-797 | ROR1 | CAR-T | 晚期乳腺癌 | Lyell Immunopharma, Inc. | 臨床1期 |
| NVG-111 | CD3 x ROR1 | 雙特異性T細胞結合器 | 慢性淋巴細胞白血病 | Novalgen Ltd. | 臨床1期 |
| PRGN 3007 | ROR1 | 自體CAR-T | 急性淋巴細胞白血病 | Precigen, Inc. | Precigen ActoBio, Inc. | 臨床1期 |
| ROR1-CAR-TILs(Guangdong Zhaotai InVivo Biomedicine) | HPK1 x PD-1 x ROR1 | CAR-TILs | 晚期惡性實體瘤 | 腦癌 | 廣東昭泰體內生物醫藥科技有限公司 | 臨床1期 |
| ROR1R-CAR(The University of Texas MD Anderson Cancer Center) | ROR1 | CAR-T | 白血病 | The University of Texas MD Anderson Cancer Center | CLL Global Research Foundation | 臨床1期 |
| SYS-6005 | ROR1 | ADC | 實體瘤 | 石藥集團巨石生物制藥有限公司 | 臨床申請 |
| Anti-ROR1 antibody scFv conjugates(Oncternal) | ROR1 | ADC | 腫瘤 | University of California San Diego | Oncternal Therapeutics, Inc. | 藥物發現 |
| CN114539411 | ROR1 | 單克隆抗體 | 腫瘤 | 山東博安生物技術股份有限公司 | 藥物發現 |
| CN116410317 | ROR1 | ADC | 增生 | 腫瘤 | 四川科倫博泰生物醫藥股份有限公司 | 藥物發現 |
| NVG-333 | ROR1 | 自體CAR-T | 腫瘤 | Novalgen Ltd. | 藥物發現 |
| ROR1 (生研生物) | ROR1 | CAR-T | 慢性淋巴細胞白血病 | 浙江生研生物科技有限公司 | 藥物發現 |
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Greater than 95% as determined by SDS-PAGE.
Immobilized ROR1 at 2 μg/ml can bind anti-ROR1 antibody (CSB-RA020067A1HU), the EC50 is 0.2450-0.3416 ng/mL.
參考文獻：
[1] https://www.nasdaq.com/press-release/merck-data-ash-2024-annual-meeting-highlights-promising-hematology-pipeline-diverse
[2] https://xueqiu.com/9353448186/307854678
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[10] Zhang, S., Zhang, H., Ghia, E.M., et al. Inhibition of chemotherapy resistant breast cancer stem cells by a ROR1 specific antibody [J]. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2019, 116, 1370–1377.
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