不容錯過的標簽抗體!
日期:2018-11-22 13:46:05
標簽抗體(Tag Antibody)
標簽抗體,別名為抗原表位,又稱抗原決定簇,是抗原分子中決定抗原特異性的特殊區(qū)域或基團,是與抗體特異性結合的結構或序列。隨著生物技術的發(fā)展,科研人員可以通過DNA重組技術,構建包含目的基因以及表位標記的融合蛋白,進而通過特異性標簽抗體對其鑒定與純化,以達到研究的需求。
隨著生物技術的發(fā)展,研究人員常利用DNA重組技術構建包含目的基因以及表位標記的融合蛋白,進而通過特異性標簽抗體對其鑒定與純化,以達到研究的需求;同時利用重組雜合體中含有一個多肽融合單體(親和標簽)這一特性,其也被廣泛用于輔助目標蛋白的純化。總之標簽抗體是開展基因蛋白表達、信號轉導和基因功能研究的常用工具。
標簽抗體(Tag Antibody)可用于檢測和純化各種商品化表達載體上的標簽序列,籍以分析檢目的蛋白的表達含量及其功能。其原理是抗原—抗體反應,這些標簽抗體可以高度特異地結合對應的標簽融合蛋白。
常用標簽包括:Flag、Myc、HA、His、GST、MBP等。
Flag標簽系統(tǒng)利用一個短的親水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目標蛋白;其純化條件是非變性的,因此可以純化所有有活性的融合蛋白。
Myc標簽(序列為:EQKLISEEDL)已成功應用于WB雜交技術、免疫沉淀IP和流式細胞術中。因此可用于檢測重組蛋白在細菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳細胞中的表達情況。Myc重組蛋白質(zhì)可通過偶聯(lián)Myc標簽抗體到二乙烯砜活化的瓊脂糖上而進行親和純化。但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會降低蛋白質(zhì)的活力,因此Myc標簽系統(tǒng)廣泛應用于檢測但很少用于純化。
HA標簽系統(tǒng)利用一個HA(influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA)短肽融合到目標蛋白。HA標簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端,該系統(tǒng)已廣泛應用于多種細胞類型,相應的HA標簽抗體也被廣泛運用。
His標簽是由6個組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專門設計用于重組蛋白的吸附純化。由于分子量小,且較容易分離和純化,是目前使用最廣泛的一種。
GST標簽體系具有蛋白表達率高,表達產(chǎn)物純化方便,利于GST抗體制備的特點。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過親和層析得到。
MBP(麥芽糖結合蛋白)標簽蛋白大小為40kDa,由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細菌中過量表達的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在細菌中表達,MBP可以融合在蛋白的N端或C端。可用MBP抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測MBP標簽標記的重組蛋白。

華美標簽抗體特別推薦
貨號:CSB-MA000041M0m
種屬反應性:All
免疫原:EQKLISEEDL (Myc) synthetic peptide conjugate to KLH
應用范圍:ELISA, WB, IF, IP
引用文獻:The double-edged sword of endoplasmic reticulum stress in uremic sarcopenia through myogenesis perturbation , Jheng JR,et al. J Cachexia Sarcopenia Muscle,Jan 29(IF=12.511)


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