外泌體的提取實驗方案
日期：2024-07-02 15:19:22
外泌體是一類含有脂質雙層結構的小泡狀體，包裹著細胞分泌的蛋白質、核酸和脂質等成分，具有重要的細胞間通訊和信號傳遞功能。提取外泌體是研究其生物學功能和臨床應用的關鍵步驟。
以下是一種常用的外泌體提取實驗方案：
材料準備：
細胞培養基（含有血清的培養基）
離心管
超聲破碎儀
超速離心機
過濾器（0.22μm）
Buffer A（10mM Tris-HCl, pH 7.4）
Buffer B（無血清的培養基）
步驟：
將培養基中的外泌體產生的細胞培養在含有血清的培養基中，當細胞生長到80-90%后更換Buffer A培養基。
收集培養基，使用低速離心（3000g，10分鐘）去除細胞碎片。
用超聲波破碎儀在冰上將上述液體進行超聲波破碎。
使用超速離心機在4℃下離心10分鐘，去除細胞碎片和大顆粒物。
取上清液，使用0.22μm的過濾器過濾。
將過濾后的上清液再次使用超速離心機在4℃下離心30分鐘，收集上清液。
外泌體的沉淀物進行Buffer B緩沖液沖洗后，再次使用超速離心機在4℃下離心30分鐘。
收集上清液即提取到的外泌體。
在實驗中要盡量避免外泌體的污染和損壞，同時要根據具體細胞類型和實驗目的進行條件的優化和調整。
上一篇： 細胞系構建全流程步驟
下一篇： 構建基因敲除的細胞系有哪些方法和步驟?
