大鼠淋巴細胞趨化因子CXCL12轉化實驗elisa
日期:2023-08-24 16:18:10
進行大鼠淋巴細胞趨化因子CXCL12的轉化實驗ELISA需要以下步驟:
樣本制備:收集大鼠淋巴組織或細胞培養上清液作為樣本。使用適當的方法,如組織勻漿或離心,獲得清晰的樣本上清液。
免疫板涂覆:取96孔酶聯免疫吸附板(ELISA plate),將目標物質(如CXCL12抗原)溶解在適當的緩沖液中,按照要求,將其加入各孔中,并在4°C下過夜孵育。
阻斷:倒掉涂有CXCL12抗原的溶液,加入阻斷緩沖液(例如5%牛血清蛋白/BSA)封閉孔中未被抗原覆蓋的表面,以防止非特異性結合。

樣本孵育:將待檢測的樣本(即淋巴組織提取物或細胞培養上清液),與試劑盒提供的稀釋緩沖液或稀釋液混合,根據實驗需求適當稀釋,并加入各孔,孵育一段時間以進行反應。
洗滌:使用洗滌緩沖液多次沖洗孔中未結合的物質,去除非特異性結合。
二抗孵育:加入與大鼠特異性IgG結合的辣根過氧化物酶(HRP)標記的二抗,例如抗大鼠IgG HRP,在適當的溫度下孵育一段時間。這個二抗將會與孔中已結合的目標物上的抗體結合。
再次洗滌:使用洗滌緩沖液徹底清洗未結合的二抗。
底物添加:加入底物液(如TMB)并在適當的時間內孵育,生成可檢測的信號。
反應終止:加入停止溶液停止底物反應,阻止信號進一步增加。
光密度測量:使用ELISA讀板儀或多功能酶標儀,測量各孔中的光密度,這反映了CXCL12的轉化水平。
數據分析:通過比較樣本的光密度與標準曲線或對照樣本的光密度,計算CXCL12的濃度或變化量。
在進行實驗前,務必閱讀和遵守相關的實驗操作指南和安全規定,并按照試劑盒說明書中的特定步驟進行操作。
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