酵母雙雜交篩選互作蛋白
日期：2023-03-29 10:45:23
酵母雙雜交（Y2H）是一種常用的蛋白質相互作用篩選技術，可用于鑒定蛋白質之間的相互作用關系。其基本原理是將兩個蛋白質分別融合到兩個不同的轉錄激活子（DNA結合區和激活區）中，當兩個融合蛋白質相互作用時，轉錄激活子得以重組，使報告基因表達。
在酵母雙雜交篩選互作蛋白的過程中，一般分為以下步驟：
構建融合蛋白質的表達載體：首先需要構建兩個表達融合蛋白質的質粒，每個質粒含有一個轉錄激活子和一個融合基因。其中一個質粒中搭載“魚叉”（bait）融合基因，另一個質粒中搭載“獵物”（prey）融合基因。
酵母雙雜交：將兩種表達融合蛋白質的酵母菌株進行交叉配對，使bait融合蛋白質與prey融合蛋白質發生相互作用，形成一個復合物。
篩選：通過對生長培養基的篩選，篩選出能夠生長和表達報告基因的菌落。
驗證：對所得陽性菌落進行鑒定和驗證，包括測序和再次雙雜交驗證。
通過酵母雙雜交技術，可以鑒定蛋白質之間的相互作用關系，進而揭示蛋白質在細胞內的功能和調控機制，為生物學研究提供了重要的工具。
在酵母雙雜交篩選互作蛋白的過程中，一般分為以下步驟：
構建融合蛋白質的表達載體：首先需要構建兩個表達融合蛋白質的質粒，每個質粒含有一個轉錄激活子和一個融合基因。其中一個質粒中搭載“魚叉”（bait）融合基因，另一個質粒中搭載“獵物”（prey）融合基因。
酵母雙雜交：將兩種表達融合蛋白質的酵母菌株進行交叉配對，使bait融合蛋白質與prey融合蛋白質發生相互作用，形成一個復合物。
篩選：通過對生長培養基的篩選，篩選出能夠生長和表達報告基因的菌落。
驗證：對所得陽性菌落進行鑒定和驗證，包括測序和再次雙雜交驗證。
通過酵母雙雜交技術，可以鑒定蛋白質之間的相互作用關系，進而揭示蛋白質在細胞內的功能和調控機制，為生物學研究提供了重要的工具。
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