sds聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白的過程
日期:2023-09-21 10:27:39
SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是常用的蛋白質分離和純化技術。下面是SDS-PAGE分離蛋白的一般過程:
1、制備凝膠
a. 準備垂直電泳槽,安裝并固定凝膠板。
b. 準備堆積凝膠(通常為聚丙烯酰胺凝膠),配制緩沖液并加入聚合物和交聯劑。
c. 混合均勻后,將混合溶液倒入凝膠板之間的空隙,插入梳子以形成樣品孔。
d. 待凝膠完全固化后,取出梳子。

2、樣品處理
a. 將待測的蛋白樣品與Laemmli緩沖液混合,通常在樣品中加入還原劑如β-巰基乙醇和變性劑SDS。
b. 在樣品中進行煮沸處理,通常使用沸水浴,以保證樣品中蛋白質被變性并與SDS結合。
3、裝載樣品
a. 將處理好的蛋白樣品滴入凝膠板的樣品孔中,盡量避免氣泡的產生。
b. 所有待測樣品裝載完成后,加入電泳緩沖液(通常是Tris-Glycine緩沖液),使凝膠完全浸沒在緩沖液中。
4、電泳
a. 將電泳槽連接到電源,并設置合適的電壓和時間。
b. 通常使用恒定電流方式進行電泳,使蛋白質在凝膠中移動,根據大小分離成不同位置的帶狀條紋。
c. 當電泳結束時,關閉電源,取出凝膠。
5、凝膠染色和可視化
a. 將凝膠浸泡在蛋白染色劑(如Coomassie藍染料)溶液中,使蛋白質帶顯現出顏色。
b. 清洗凝膠,去除多余的染料。
c. 可以使用透明的酸性背景板觀察帶狀條紋,也可以使用蛋白質成像設備進行數字化的分析和記錄。
通過上述步驟,可以實現對蛋白質樣品的分離和定量,并且可以進一步進行后續的蛋白質分析和鑒定。請注意,具體實驗操作應根據所用設備和試劑的說明進行。
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