重組蛋白akta純化流程
日期:2023-08-03 13:25:12
重組蛋白的純化過程可以使用AKTA蛋白純化系統來完成。以下是一般的AKTA純化流程:
樣品加載:
具體的純化流程和參數設置會受到目標蛋白的性質、純化柱的類型以及實驗室的具體要求等因素的影響。因此,在實際操作中,應根據具體情況進行優化和調整,并參考相關的AKTA系統操作手冊和相關文獻資料。
準備工作:
將用于純化的介質(如親和層析柱、離子交換層析柱、凝膠過濾柱等)連接到AKTA系統上。
確保純化過程中所需的緩沖液和溶劑已準備好,并經過消毒和去除氣泡。
樣品加載:
將包含目標蛋白的樣品通過注射器或自動進樣器輸入至AKTA系統。
設置合適的進樣量和流速,使得樣品能夠被純化柱充分與之接觸。
洗脫緩沖:
使用適當的洗脫緩沖液在純化柱上進行洗脫。具體的洗脫緩沖液配方和洗脫條件可以根據純化柱的性質和目標蛋白的特性進行調整。
純化柱洗脫:
在洗脫緩沖液的作用下,目標蛋白與純化柱上的固定相相互作用,從而實現目標蛋白的捕獲。
調整洗脫緩沖液的成分和條件,以實現目標蛋白的選擇性洗脫和純化。
再平衡(Equilibration):
在洗脫完畢后,使用再平衡緩沖液將純化柱恢復至初始狀態,以便進行下一次純化循環或存儲。
洗滌和再生:
在純化過程中可能需要定期對純化柱進行洗滌和再生,以去除非特異性結合的雜質和恢復固定相的活性。
監測純化效果:
可以使用各種技術(如SDS-PAGE、Western blot、ELISA等)來監測純化過程中目標蛋白的存在和純度。
具體的純化流程和參數設置會受到目標蛋白的性質、純化柱的類型以及實驗室的具體要求等因素的影響。因此,在實際操作中,應根據具體情況進行優化和調整,并參考相關的AKTA系統操作手冊和相關文獻資料。
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