gst蛋白純化原理
日期：2023-07-18 15:37:53
GST蛋白純化是一種常用的蛋白質純化方法，其中GST代表谷胱甘肽S轉移酶（glutathione S-transferase），它可以與特定的GST標簽融合的目標蛋白結合，并利用這個特定結合關系實現目標蛋白的純化。
GST蛋白純化的原理如下：
融合表達：在目標蛋白的編碼序列的N-或C-端附加GST標簽，使其與GST蛋白融合成為一個重組蛋白。
細胞培養(yǎng)和表達：將融合蛋白的基因導入到表達宿主細胞中，通過合適的誘導條件，如添加適量的誘導劑（例如IPTG），使細胞開始表達GST融合蛋白。
細胞破碎和裂解：收獲經過誘導表達的細胞，并通過物理方法（如超聲波破碎）或化學方法（如溶菌酶處理）破碎細胞膜，釋放融合蛋白。
GST親和層析：將溶解的GST融合蛋白與具有親和力的物質（如谷胱甘肽瓊脂糖，glutathione agarose）結合，形成GST-目標蛋白復合物。
洗脫和純化：通過洗脫步驟去除非特異結合的雜質蛋白，保留GST-目標蛋白復合物。一般采用緩沖液改變pH值或濃度梯度逐步洗脫。
重組蛋白的后處理：如果需要分離目標蛋白與GST標簽，則進行進一步的處理，例如利用特定的蛋白酶對標簽進行切割。
GST蛋白純化原理的關鍵在于利用GST標簽與谷胱甘肽瓊脂糖的結合能力，實現對目標蛋白的選擇性結合和純化。這種方法廣泛應用于分子生物學和生物化學研究中，可以快速、有效地純化目標蛋白。
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