蛋白質(zhì)分離并檢測蛋白表達(dá)的方法
日期：2023-03-10 15:34:19
蛋白質(zhì)提取 Western Blotting（WB）是一種常用的分離蛋白質(zhì)并檢測蛋白質(zhì)表達(dá)的方法。以下是一般蛋白質(zhì)提取 Western Blotting 的步驟：
1.細(xì)胞裂解：用裂解液將細(xì)胞破裂，使蛋白質(zhì)裸露出來。
2.離心：離心使得細(xì)胞的碎片、DNA等雜質(zhì)沉淀下來，得到蛋白質(zhì)上清液。
3.測定蛋白質(zhì)濃度：使用BCA或者Lowry方法等常見方法測定蛋白質(zhì)的濃度。
4.電泳：將提取的蛋白質(zhì)樣品通過聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行分離，分離后的蛋白質(zhì)可被轉(zhuǎn)移到膜上。
5.膜轉(zhuǎn)移：將凝膠上分離出來的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到聚乙烯醇基礎(chǔ)的膜上。
6.封閉：將轉(zhuǎn)移后的膜在牛奶粉中進(jìn)行非特異性的封閉。
7.抗體反應(yīng)：用特異性抗體與膜上的蛋白質(zhì)結(jié)合。
8.檢測：將特異性抗體標(biāo)記上標(biāo)記物檢測抗體與膜上蛋白質(zhì)結(jié)合的情況。
需要注意的是，蛋白質(zhì)提取的具體方法需要根據(jù)不同的樣本和目的進(jìn)行優(yōu)化和調(diào)整。常見的蛋白質(zhì)提取方法包括：RIPA緩沖液、NP-40緩沖液、Tris-HCl緩沖液、SDS緩沖液等。
1.細(xì)胞裂解：用裂解液將細(xì)胞破裂，使蛋白質(zhì)裸露出來。
2.離心：離心使得細(xì)胞的碎片、DNA等雜質(zhì)沉淀下來，得到蛋白質(zhì)上清液。
3.測定蛋白質(zhì)濃度：使用BCA或者Lowry方法等常見方法測定蛋白質(zhì)的濃度。
4.電泳：將提取的蛋白質(zhì)樣品通過聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行分離，分離后的蛋白質(zhì)可被轉(zhuǎn)移到膜上。
5.膜轉(zhuǎn)移：將凝膠上分離出來的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到聚乙烯醇基礎(chǔ)的膜上。
6.封閉：將轉(zhuǎn)移后的膜在牛奶粉中進(jìn)行非特異性的封閉。
7.抗體反應(yīng)：用特異性抗體與膜上的蛋白質(zhì)結(jié)合。
8.檢測：將特異性抗體標(biāo)記上標(biāo)記物檢測抗體與膜上蛋白質(zhì)結(jié)合的情況。
需要注意的是，蛋白質(zhì)提取的具體方法需要根據(jù)不同的樣本和目的進(jìn)行優(yōu)化和調(diào)整。常見的蛋白質(zhì)提取方法包括：RIPA緩沖液、NP-40緩沖液、Tris-HCl緩沖液、SDS緩沖液等。
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