間接elisa實驗步驟
日期：2023-10-17 15:00:15
間接ELISA是常用的免疫學實驗技術，用于檢測特定抗原或抗體的存在。以下是間接ELISA實驗的基本步驟：
抗原涂附：將目標抗原溶液加入到微孔板中，使其吸附在孔底表面上，通常需要在4°C下孵育過夜。
阻斷：倒掉孔中的抗原溶液，然后加入一種阻斷劑（如5%牛血清蛋白/BSA或1%乳清），以防止非特異性結合。孵育一段時間（如1小時）。
抗體孔：倒掉阻斷劑，加入稀釋好的第一抗體溶液（特異性識別目標抗原的抗體），孵育一段時間。
洗滌：倒掉孔中的第一抗體溶液，用洗滌緩沖液洗滌孔底，以去除未結合的抗體和其他非特異性成分。可以重復洗滌2-4次，每次洗滌需要充分。
二抗孔：加入稀釋好的辣根過氧化物酶（HRP）標記的第二抗體溶液，它與第一抗體結合。孵育一段時間。
再次洗滌：倒掉孔中的二抗溶液，用洗滌緩沖液洗滌孔底，去除未結合的二抗和其他非特異性成分。重復洗滌2-4次。
底物反應：加入適當的底物液，其可以通過HRP催化產生可檢測的顏色反應。孵育一段時間。
反應停止：加入停止液，停止底物的反應。這通常會改變顏色或產生一個可讀的信號。
讀取結果：使用ELISA讀板儀測量每個孔的吸光度或熒光強度，并與標準曲線或對照樣品進行比較，以確定目標抗原或抗體的含量。
以上是間接ELISA的基本步驟，實驗過程中需注意實驗條件、試劑稀釋倍數、孔板操作、洗滌緩沖液的選擇等因素。具體實驗細節和條件可根據具體實驗目的和試劑的要求進行優化和調整。
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