外泌體中的miRNA提取
日期:2023-06-19 16:12:20
外泌體(extracellular vesicle,EV)具有信息傳遞和調節功能。EV中含有豐富的生物活性物質,包括蛋白質、核酸、肽類等。其中,miRNA是一類長度約為22nt的小RNA,在細胞的發育、生長、轉化和毒理等過程中扮演著重要的角色。然而,由于EV中miRNA的含量很少,因此對EV中miRNA的提取是研究的關鍵步驟之一。以下簡要介紹了目前常用的三種EV中miRNA提取方法。
方法一:商業化試劑盒
商業化試劑盒是目前最常用的EV中miRNA提取方法之一。這種方法基于慢鎮靜離心(ultracentrifugation)和柱層析(column chromatography)等技術,可以通過化學反應和特定試劑的選擇,高效地從EV中提取miRNA。其主要優勢在于操作簡單、易于標準化、重復性好等方面。目前市場上銷售的商業試劑盒品種豐富,價格也較為合理,因此深受廣大研究者的喜愛。
方法二:超濾法
超濾法是基于膜分離技術的miRNA提取方法,可以通過在某些聚合物膜上設定特定孔徑大小,將EV分離并收集所需要的miRNA。與其他方法相比,超濾法具有提取效率高、操作簡單、成本低等優勢,但由于需要使用較為昂貴的超濾膜和磁珠等材料,因此在實際應用中受到限制。
方法三:電泳法
電泳法是通過電場作用促進miRNA遷移的方法,通過其在電場中的運動特性,可將目標miRNA從EV中分離和提取。這種方法需要對樣品進行預處理,包括低滲溶液(hypotonic buffer)處理、電泳緩沖液(electrophoresis buffer)處理等,而且儀器設備相對較為昂貴。但是,電泳法可以有效避免某些化學方法中可能存在的干擾因素,對于一些高凈化純度的樣品具有較好的適用性。
在實際應用過程中,提取EV中miRNA要考慮到樣品的來源和性質、試劑的選擇和使用、操作的規范化等方面,以確保提取的miRNA質量和數量達到要求。同時,還需要對提取后的miRNA進行質檢、純化和定量等處理,以確保其能夠滿足后續的研究需求。
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