elisa抗體阻斷實驗原理
日期：2023-09-08 15:51:00
ELISA酶聯免疫吸附試驗抗體阻斷實驗是一種常用的方法，用于檢測和驗證抗體對特定抗原的特異性結合能力。其原理如下：
實驗準備：將目標抗原固定在固相（如微孔板）上，并進行非特異性結合位點的封閉，以避免后續步驟中非特異性背景信號的干擾。
樣品處理：將待測抗體與目標抗原預先混合，并孵育一段時間，使其形成抗原-抗體復合物。
反應與洗滌：將混合物加入已經固定了目標抗原的微孔板中，使復合物與固相上的抗原結合。然后進行多次洗滌，去除非特異性的未結合物質。
抗體標記物添加：加入與待測抗體不競爭的標記物標記的第二抗體或探針抗體。該抗體會結合到待測抗體的Fc區域。
酶標記物的反應與洗滌：加入酶標記物底物，使酶產生染色反應。此時，標記物所在的位置與酶活性成正比。
反應停止與測量：通過加入染色反應停止劑，停止酶反應，并阻斷染色產物生成。利用光譜法或比色法測量吸光度，即可定量分析待測抗體的阻斷效果。
根據實驗設計和需要，可以將該方法用于血清、細胞上清液、組織勻漿等樣品中的待測抗體的特異性結合能力檢測與驗證。實驗結果可用于評估抗體的親和力、特異性以及其對其他類似抗原的交叉反應性。
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