高通量抗體篩選的均相抗體結(jié)合實驗

日期：2023-06-16 14:14:02

高通量抗體篩選的均相抗體結(jié)合實驗（Homogeneous Antibody Binding Assays，HABA）是利用小分子競爭性配位分析測定蛋白質(zhì)與特定配體的結(jié)合特異性的技術(shù)。該技術(shù)在藥物發(fā)現(xiàn)和研究等領(lǐng)域中有著廣泛的應(yīng)用，尤其在抗體的篩選中起到了非常重要的作用。以下將對HABA的原理、步驟及應(yīng)用進行介紹。

一、原理

HABA根據(jù)小分子競爭性配位分析原理建立，即不同親和力的分子對于共存的配合物有不同的競爭性影響。在細胞外淀粉樣蛋白β（amyloid β-peptide，Aβ）的草圖中，大約25%具有1-40氨基酸殘基的長度。這些Aβ由兩個（Aβ1-42/43）或三個（Aβ1-40/42/43）亞型組成，以及更多其他的變體。證據(jù)表明，PSEN1基因的突變會導(dǎo)致AD或FAD。
HABA技術(shù)中，小分子配體（例如熒光素素）與與之競爭的大分子（例如抗體）結(jié)合后，熒光素素的釋放與分子的親和力成反比。因此，一種具有高親和力的大分子會顯著降低熒光素素的釋放，從而產(chǎn)生高度熒光信號。相反，低親和力的大分子會釋放更多的熒光素，并產(chǎn)生較低的熒光信號。通過這種競爭性配位分析測定，可以定量測定大分子與小分子的結(jié)合強度與特異性。同時，由于熒光素素與蛋白質(zhì)的結(jié)合是可逆的，因此可以反復(fù)利用。

二、步驟

HABA技術(shù)通常包括以下步驟：

1.準備樣品：將要測試的抗體樣品和熒光素素標(biāo)記的配體在緩沖液中混合。

2.孵育：將混合后的樣品在適當(dāng)?shù)臏囟认路跤猿浞职l(fā)生結(jié)合反應(yīng)。

3.添加競爭物：添加不同濃度的某個競爭性物質(zhì)，例如未標(biāo)記的小分子配體或另一個抗體，以形成配體-大分子競爭反應(yīng)。

4.測量熒光：通過測量熒光的強度來確定配體與大分子之間的競爭關(guān)系。高親和力的抗體會導(dǎo)致配體釋放得更少，從而產(chǎn)生更高的熒光信號，反之亦然。

5.數(shù)據(jù)分析：使用得到的數(shù)據(jù)來計算大分子的親和力。

三、應(yīng)用

HABA技術(shù)在抗體篩選中有著廣泛應(yīng)用。通過利用競爭性測定技術(shù)，可以高通量篩選大量不同親和力的抗體。尤其適用于面向特定蛋白質(zhì)的抗體篩選和最優(yōu)抗體的優(yōu)化過程。例如，對于一種新的抗體，可以通過HABA技術(shù)評估其與靶蛋白的結(jié)合親和力，并篩選出具有最高親和力的抗體。此外，還可以使用HABA技術(shù)評估抗體在不同條件下的穩(wěn)定性、親和力和特異性等參數(shù)。

HABA技術(shù)作為一種高通量、簡便和可重復(fù)的技術(shù)方法，在藥物發(fā)現(xiàn)、抗體工程和基礎(chǔ)生物學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用。它可以提供快速的決策和準確的數(shù)據(jù)，從而加速藥物發(fā)現(xiàn)和研究過程。