標簽抗體與內參抗體的區別是什么?
日期:2023-06-01 15:08:36
標簽抗體和內參抗體都是用于免疫印跡(Western blotting)等蛋白質檢測技術中的關鍵元素。
首先,我們需要了解一下 Western blotting 技術的基本原理。Western blotting 技術是利用特異性抗體結合目標蛋白質,并將其從復雜的混合蛋白質體系中分離出來,然后通過抗體與蛋白質結合反應產生信號,再利用檢測系統檢測、定量這些信號,來判斷待測樣品中目標蛋白質的存在和表達水平。
現在來說說標簽抗體和內參抗體的區別:
1、標簽抗體
標簽抗體通常是特異性識別某種特殊標記的抗體,例如 FLAG 標簽、HA 標簽、Myc 標簽等常見的標簽。在 Western blotting 實驗中,通常會利用這些標簽進行蛋白質的表達和檢測。例如,當我們在表達待檢測蛋白質時,同時將其與 FLAG 標簽融合,那么在 Western blotting 實驗中,我們就可以用相應的抗 FLAG 標簽的抗體進行檢測。
標簽抗體在 Western blotting 實驗中通常作為檢測實驗的主要抗體,用于檢測目標蛋白質的存在與否。由于標簽抗體可以專門識別標記,具有極高的特異性和靈敏度,因此在實驗中被廣泛使用。
2、內參抗體
內參抗體是用于標準化 Western blotting 實驗中某些步驟的抗體。Western blotting 實驗中,我們往往需要使用內參蛋白來作為比較基準。內參蛋白必須滿足在各個樣品中表達水平相對穩定,且表達量不受待測蛋白質的影響。在進行 Western blotting 實驗時,我們會將待檢測蛋白和內參蛋白一起加載到同一個凝膠或膜片上,并通過檢測它們的比例來計算待測蛋白的表達量。
內參抗體通常用于檢測內參蛋白,而不是作為待檢測蛋白的主要抗體。例如,β-actin、GAPDH等常見內參蛋白都有相應的抗體可以使用,這些抗體具有良好的可控性和快速性,可以很好地輔助實驗的標準化。
標簽抗體和內參抗體主要區別在于在 Western blotting 實驗中的使用目的和方式。標簽抗體通常作為檢測實驗的主要抗體,用于檢測目標蛋白質的存在與否;而內參抗體則用于標準化實驗過程中某些步驟,作為比較基準。
上一篇: 單克隆抗體制備流程圖
下一篇: 多克隆抗體生產工藝流程