質粒提取原理
日期：2010-08-02 13:54:00
質粒是細胞內的一種環狀的小分子DNA，是進行DNA重組的常用載體。作為一個具有自身復制起點的復制單位獨立于細胞的主染色體之外，質粒DNA上攜帶了部分的基因信息，經過基因表達后使其宿主細胞表現相應的性狀。在DNA重組中，質?；蚪涍^改造后的質粒載體可通過連接外源基因構成重組體。
從宿主細胞中提取質粒DNA，是DNA重組技術中最基礎的實驗技能。分離質粒DNA有三個步驟：培養細菌使質粒擴增，收集和裂解細菌，分離和純化質粒DNA。
在質粒提取過程中，由于機械力、酸堿度、試劑等的原因，可能使質粒DNA鏈發生斷裂。所以，多數質粒粗提取物中含有三種構型的質粒：共價閉合環狀DNA（cccDNA）： 質粒的兩條鏈沒有斷裂；超螺旋開環DNA（ocDNA）： 質粒的一條鏈斷裂；松弛的環狀分子線形DNA（lDNA）： 質粒的兩條鏈均斷裂；線性分子質粒DNA的分子構型 。
質粒DNA瓊脂塘凝膠電泳模式圖可分為：松弛線性的DNA； 松弛開環的OC構型； 超螺旋的SC構型。由于瓊脂糖中加有嵌入型染料溴化乙錠，因此，在紫外線照射下DNA電泳帶成橘黃色。 道中的SC DNA走在最前沿，OC DNA則位于凝膠的最后邊；道中的L DNA 是經核酸內切限制酶切割質粒之后產生的，它在凝膠中的位置介于OC DNA 和 SC DNA 之間。
