替代PCR，RPA檢測埃博拉等致命病毒
日期：2014-11-06 09:27:39
重組酶聚合酶擴增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術（由英國公司TwistDx Inc開發）。以此為基礎的TwistAmp® 核酸擴增產品，能夠在15分鐘內進行常溫下的單分子核酸檢測。該技術對硬件設備的要求很低，特別適合用于體外診斷、獸醫、食品安全、生物安全、農業等領域。
RPA檢測瘧原蟲核酸擴增是目前最靈敏的瘧原蟲（P. falciparum）特異性檢測法。然而，PCR需要熱循環設備和專業性操作，資源匱乏的地區往往難以滿足這些條件。在這種情況下，與側流層析結合的RPA有著很大的應用前景。
《Malaria Journal》雜志今年三月份發表的一項研究中，研究人員將RPA基礎反應、TwistAmp nfo探針和側流層析結合起來，實現了瘧原蟲18S rRNA基因的高靈敏度快速檢測。在38°C的條件下，只需要不到十分鐘的擴增，就能檢出含有四個瘧原蟲的樣本。加上側流層析的檢測時間，整個流程總共只需要15分鐘，而且肉眼可以直接看到檢測結果。
研究人員用不同瘧原蟲測試了這種方法的靈敏度和特異性。研究顯示，所有瘧原蟲都被成功檢出，所有非瘧原蟲都得出了陰性結果。文章指出，這一方案將大大改善資源匱乏地區的瘧原蟲分子診斷。
RPA檢測埃博拉等十種致命威脅檢測傳染性疾病的綜合panel，有助于資源匱乏地區進行實地分子診斷，對生物防御工作也有很大的幫助。
《Journal of Clinical Microbiology》雜志去年四月的一項研究開發了一個RPA檢測panel，對土拉弗朗西斯氏菌（Francisella tularensis）、鼠疫耶爾森氏菌（Yersinia pestis）、炭疽芽孢桿菌（Bacillus anthracis）、天花病毒進行RPA分析，對裂谷熱病毒（Rift Valley fever virus）、埃博拉病毒、Sudan病毒和馬爾堡病毒進行RT-RPA分析。研究顯示，這些RPA和RT-RPA的分析靈敏度大多在16-21個分子之間（與實時PCR相當），42°C下只需運行6-10分鐘，而且不存在交叉反應。
RPA檢測冠狀病毒2012年在中東首次鑒定的中東呼吸綜合癥冠狀病毒( Middle East respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV)是一種新型的冠狀病毒。這種病毒很快傳入了歐洲，給公共安全機構敲響了警鐘。
目前，MERS-CoV檢測主要依賴于實時RT-PCR，需要收集患者樣本然后到專門的實驗室去檢驗。因此，亟需能夠進行實地檢測的快速裝置。
《PLOS Currents：Outbreaks》去年十二月發表的一項研究，開發了一個能在3-7分鐘內鑒定MERS-CoV的便攜式RT-RPA裝置。在42°C條件下，等溫MERS-CoV RT-RPA與實時RT-PCR一樣敏感，可檢出10個RNA分子。文章指出，這個便攜裝置是監控MERS-CoV傳播，尋找其動物宿主的理想方法。
除此之外，世界各地的研究者們近期還用RPA技術檢測了許多其他的病毒。比如南美對蝦濃核癥病毒、對蝦白斑綜合癥病毒、李痘病毒、櫻桃小果病毒2、黃熱病毒、牛冠狀病毒、施馬倫貝格病毒、牛病毒性腹瀉病毒、口蹄疫病毒等等。RPA甚至還被用來直接檢驗尿液中的沙眼衣原體。
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