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CCR6:“專一性”趨化因子受體,炎癥性和消化系統腫瘤藥物研究的潛力靶標!

日期:2024-01-12 09:22:00

2024年1月3日,一篇最新綜述“Research progress on the role of tumor-associated macrophages in tumor development and their use as molecular targets”詳細闡述了腫瘤相關巨噬細胞(TAMs)在腫瘤進程中的重要性 [1]。其中,CCR6-CCL20軸對TAMs和Treg的招募和極化有著顯著影響。例如,在結腸癌中,TAMs分泌的CCL20招募CCR6+的Treg細胞,形成免疫抑制的微環境,促進腫瘤的發展。CCR6是一種G蛋白偶聯趨化因子受體,與CCL20緊密結合形成一對具有高度親和力和“專一性”的趨化因子受配體。大量研究表明,CCR6與多種炎癥性疾病相關,并且在多種消化系統腫瘤的發生與發展中發揮重要作用。CCR6作為一種獨特的趨化因子受體,有望為未來的靶向藥物研發提供新的策略。今天,讓我們深入了解這個“專一性”趨化因子受體CCR6!


1. 什么是趨化因子家族?

趨化因子家族是一組具有多種生物學功能的小分子活性蛋白,能夠被多種細胞分泌,其主要功能是引導細胞移動。人體內已發現50余種趨化因子,分為四個亞型:C(XCL1-XCL2)、CC(CCL1-CCL28)、CXC(CXCL1-CXCL17)和CX3C(CX3C1)。這些趨化因子通過特定的受體(G蛋白偶聯七次跨膜受體)與細胞表面結合,引導細胞遷移到生物體內特定的位置。趨化因子受體分為四個亞家族:CXC類受體(CXCR1-CXCR7)、CC類受體(CCR1-CCR10)、XC類受體(XCR1)和CX3C類受體(CX3CR1)。趨化因子和受體往往是一對多或多對一結合關系,即一個趨化因子可以與多個受體結合,一個受體也可以與多個趨化因子結合。然而,人體內存在6種匹配唯一的趨化因子和趨化因子受體,分別為CCL20-CCR6,CCL25-CCR9CXCL16-CXCR6CX3CL1-CX3CR1CXCL12-CXCR4CXCL13-CXCR5 [1-5]


2. 什么是CCR6?

2.1 CCR6的結構

CC基序趨化因子受體6(CC motif chemokine receptor 6,CCR6)是一種跨膜G蛋白偶聯受體。人類CCR6基因位于染色體6q27,而許多CCR基因位于染色體3p。CCR6具有G蛋白偶聯趨化因子受體所具有的氨基酸殘基和序列基序特征,其中包括酸性N末端區域中潛在的兩個N連接糖基化位點,以及其它兩個分別位于細胞外第一和第三個環上的糖基化位點。此外,CCR6的一級結構包括四個高度保守的半胱氨酸殘基(兩個形成二硫橋,另外兩個未形成二硫鍵)。由于趨化因子受體結構的復雜性,CCR6趨化因子受體的三維空間結構尚未確定,目前僅趨化因子受體CXCR1和CXCR4的高級結構被鑒定。因此,對于趨化因子受體CCR6的結構還有待進一步的探究和認識(圖1[6-9]

2.2 CCR6的表達和功能

CCR6在淋巴和非淋巴組織中均有表達,其中在脾、淋巴結、闌尾、胰腺中尤為顯著,而在胸腺、結腸、小腸、胎兒肝臟和睪丸中較少。此外,CCR6還表達于各種白細胞亞群,包括未成熟樹突狀細胞(iDC)B細胞、T細胞(促炎Th17細胞,調節性Treg細胞)、NK細胞和中性粒細胞。大量研究揭示,CCR6異常表達與多種疾病相關,包括炎癥性腸病、牛皮癬、類風濕關節炎和多發性硬化癥,且表達情況與疾病嚴重程度之間存在很強的相關性。此外,與其它的趨化因受體不同的是,它只與唯一的配體CCL20相結合,構成了CCR6/CCL20。近期的研究發現CCR6/CCL20在多種人類腫瘤細胞中高表達,并且與腫瘤的侵襲轉移密切相關 [6-9]

CCR6拓撲結構圖

圖1. CCR6拓撲結構圖 [9]


3. 什么是CCR6的配體?

CC基序趨化因子配體20(CCL20)是已知唯一能與CCR6結合并促使CCR6細胞遷移的配體,具備高親和力和專一性。CCL20又稱巨噬細胞炎癥蛋白3a(MIP-3a)或肝臟活化調節因子(LARC),主要由上皮細胞產生,其表達水平在炎癥條件下顯著增加。CCL20可以受多種細胞因子調控,研究表明IL-1aIL-1βIL-17IL-21TNF-a、IFN-y等可以誘導CCL20的表達,而IL-10可以下調CCL20的表達。雖然CCL20仍然是CCR6已知的唯一趨化因子配體,然而有研究正在探索其新配體,如人類B-防御素1(HBD-1)和2(HBD-2[10-12]

趨化因子通過與趨化因子受體相互結合發揮作用,從而實現各類細胞在系統和組織器官之間的遷移,維護機體的穩態。研究表明,CCL20的N末端是CCR6激活的關鍵觸發位點。CCL20的N末端通過氫鍵和鹽橋與CCR6的ECL2和R421.28側鏈相互作用,從而直接將CCL20的N端與CCR6的7次跨膜區結合,這對CCR6的激活至關重要。CCR6/CCL20結合時,其激活的信號非常復雜,目前普遍的解釋是Ca2+P13K/Akt等第二信使被激活,從而激活下游蛋白激酶,引起級聯反應,從而促進表達相應趨化因子的細胞發生轉移 [13-14]


4. CCR6相關的信號調控機制

4.1 CCR6促腫瘤微環境T細胞遷移機制

通過建立小鼠結腸癌皮下移植瘤模型的研究發現,在腫瘤組織中有大量表達趨化因子受體CCR6的調節性T細胞浸潤。體內外實驗表明,小鼠CMT93結腸癌細胞和腫瘤相關巨細胞都分泌CCR6唯一的配體CCL20。在皮下移植瘤的腫瘤微環境中注射重組CCL20能招募大量調節性T細胞,并顯著促進腫瘤的發展。最后,使用CD11b-DTR全身選擇性敲除巨噬細胞的小鼠模型顯示,皮下移植瘤后腫瘤微環境中趨化因子CCL20分泌減少,阻止了調節性T細胞在腫瘤微環境的遷移。總之,小鼠結腸癌模型中,腫瘤相關巨噬細胞通過分泌趨化因子CCL20招募CCR6表達的調節性T細胞,并促進腫瘤的生長。這一發現為未來腫瘤免疫療法提供了潛在的治療靶點 [15]

4.2 CCR6促腫瘤血管形成機制

研究人員利用慢病毒轉染技術構建了CCR6敲低和過表達的結腸直腸癌細胞系,相關實驗揭示CCR6敲低抑制了血管生成,而CCR6過表達增強了腫瘤血管生成能力。加入重組人CCL20(rhCCL20)增強了對血管生成的促進作用,該效果可被針對hCCL20和CCR6的抗體阻斷,表明CCR6促進血管生成依賴于CCL20的分泌。進一步的分子機制研究表明,VEGF-Aangiopoietin-langiopoietin-2MMP9表達上調,其中VEGF-A表達上調最為顯著,提示VEGF-A可能是介導CCR6促進腫瘤血管生成的關鍵分子。采用ERK和PI3K通路的抑制劑(LY294002)處理腫瘤細胞后,VEGFA表達下調,暗示PI3K/AKT通路參與了CCR6介導的血管生成(圖2[16]

CCR6促腫瘤血管形成機制

圖2. CCR6促腫瘤血管形成機制 [16]


5. CCR6與疾病相關研究

近年來,國內外對CCR6的功能及其在生物體內的作用進行了廣泛研究。研究集中在趨化因子受體CCR6以及其配體CCL20(CCR6/CCL20)的相互作用上。這種相互作用在控制炎性疾病、自身免疫性疾病以及腫瘤(尤其是消化系統腫瘤)等疾病過程中扮演著關鍵角色。這為研究者更好地理解和干預與疾病相關的腫瘤、免疫和炎癥過程提供了重要線索。

5.1 CCR6/CCL20和炎癥性疾病研究

CCR6/CCL20在炎癥性疾病中扮演著關鍵角色,參與組織破壞并影響疾病嚴重程度 [9]。在腸道炎癥疾病中,CCR6信號可調節巨噬細胞和樹突狀細胞,影響組織損傷和炎癥反應。CCR6缺失可能有助于對抗腹膜炎,減輕細菌感染引起的炎性反應 [9]。此外,CCR6/CCL20信號也在慢性氣道炎癥中扮演關鍵作用,影響免疫細胞在炎癥部位的聚集 [17]。另外,有研究指出CCR6/CCL20在動脈粥樣硬化中具有重要影響,特別是在單核細胞的趨化方面 [18]。CCR6-/-小鼠的實驗顯示了輕微的動脈粥樣硬化受損,暗示CCR6和CCL20或許參與了血管壁的自我調節循環 [18]。除了單核細胞外,其它CCR6+白細胞亞群可能也在動脈粥樣硬化的進展中扮演重要角色,其確切作用尚需進一步研究探討 [19]

5.2 CCR6/CCL20和自身免疫疾病研究

研究表明,CCR6-/-小鼠在皮膚接觸性超敏反應方面表現更為嚴重,而在退發型超敏反應、急性移植物抗宿主疾病和氣道變應性炎癥方面表現減輕。此外,在系統性硬化病、HIV、銀屑病皮炎等疾病中發現了CCR6的相關性。實驗中觀察到CCR6和CCL20在病變組織中上調,并與免疫細胞的聚集相關。另一方面,在自身免疫性肝炎和氣道變應性炎癥模型中,CCR6/CCL20信號可能影響T細胞的遷移和活化。總體而言,CCR6/CCL20通過調節免疫細胞在病變部位的聚集,參與調節免疫應答。盡管如此,其具體作用機制仍未完全闡明 [10, 20-21]

5.3 CCR6/CCL20和腫瘤研究

CCR6/CCL20的表達已在多種癌癥中被發現,主要與結腸癌、胃癌、胰腺癌、肝癌和食管癌等消化系統癌癥有關 [22-31]。這些研究主要聚焦于CCR6/CCL20相互作用在促進腫瘤細胞遷移、增殖以及影響腫瘤免疫逃逸等方面。例如,有研究發現在原發性腫瘤標本中,CCR6在遠處轉移組中顯著升高,暗示著可能存在遠處異時性轉移,然而在肝肺器官的特異性轉移中并未發現明顯差異 [27]。其它研究表明CCR6/CCL20信號可能通過促進Th9細胞遷移進而增加腫瘤細胞的擴散,而抗CCL20的抑制作用能夠減少Th9細胞的趨化能力 [25]。除此之外,CCR6/CCL20相互作用還涉及腫瘤免疫逃逸,其中一些實驗研究發現在腫瘤患者中特定類型的Th17細胞增加,這些細胞可能與TGF-β的調控有關 [31]。目前CCR6/CCL20在消化系腫瘤的研究還比較淺顯,進一步探討其在消化系統腫瘤的發生、發展的作用機理,將為相關藥物研究帶來新策略。


6. CCR6的臨床藥物研究前景

目前已有兩種與CCR6相關的藥物,分別是PF-07054894和HG-1112。來自Pfizer Inc.的PF-07054894是一種CCR6拮抗劑,可通過阻斷CCR6與其配體的結合,抑制CCR6介導的炎癥反應,目前正在潰瘍性結腸炎的臨床前期試驗中。另一種藥物HG-1112是一種CCR6和TRPV1的雙重調節劑,具有抗炎和鎮痛作用,但其在研適應癥尚未公開。PF-07054894和HG-1112均為小分子化藥物,具有較好的生物利用度和組織滲透性。現在已開發出很多趨化因子受體的小分子抑制劑并應用在臨床I到II期的研究中,最為著名的就是CXCR4的小分子化合物針對艾滋病的研究,最近這種小分子抑制劑也在腫瘤轉移的臨床研究中進行開發。期待CCR6也像CXCR4一樣開發出特異性很強的小分子化合物,為炎癥性、消化系統疾病、自身免疫性疾病、腫瘤領域帶來新的研究方向。

為鼎力協助各藥企針對CCR6在炎癥性、消化系統疾病、自身免疫性疾病、腫瘤等疾病在臨床中的研究,華美CUSABIO推出CCR6活性蛋白(CSB-MP004845HU)和抗體(CSB-RA004845MA1HU)產品,助力您在CCR6機制方面的研究或其潛在臨床價值的探索。

華美 CUSABIO CCR6 蛋白

Recombinant Human C-C chemokine receptor type 6(CCR6)-VLPs (Active) Code: CSB-MP004845HU

CCR6 Protein Monomer and Homodimer Analysis by SDS-PAGE
CCR6 Protein Monomer and Homodimer Analysis by SDS-PAGE

CSB-MP004845HU is detected by Mouse anti-6*His monoclonal antibody. The two bands respectively correspond to monomer, Homodimer.

Excellent Bioactivity Validated by Functional ELISA
Excellent Bioactivity Validated by Functional ELISA

Immobilized Human CCR6 at 10μg/mL can bind Anti-CCR6 recombinant antibody (CSB-RA004845MA1HU). The EC50 is 44.79-56.10 ng/mL.VLPs (CSB-MP3838) is negative control.


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