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RSPO1: 決定“性別之戰”的關鍵因子,在類器官培養中“備受青睞”?

日期:2022-08-09 09:37:52

性別遠比看起來復雜。有越來越多的證據表明,性別不是簡單的二元法。多年以來,科學家都認為女性的發育是默認的過程,而男性的發育則是因Y染色體上的某個基因而激活。1990年,科學家發現Y染色體上有一個叫做SRY的基因能夠決定雄性性別。比如,攜帶XX染色體的人,如果攜帶包含SRY基因的Y染色體片段,就會發育為男性。到了2000年左右,人們發現了雌性也并非總是“被動”發育出來的,如WNT4基因能夠促進卵巢主動發育,抑制睪丸發育。2011年,有研究人員表明,一種叫做RSPO1的關鍵卵巢基因也可能會導致性腺發育異常,例如導致性染色體為XX的個體發育出卵睪(ovotestis)——一種同時存在睪丸和卵巢組織的性腺。

這個結果顛覆了我們普遍認為的“性別就是簡單的非男即女”的傳統觀念,隨著科學家們的深入研究,我們發現:男女之外,還有多種性別。今天,我們就來探討有關女性性別決定的RSPO1基因。

1、什么是RSPO1?

RSPO1,又稱CRISTIN3,是R-spondins基因家族成員,該基因編碼一種分泌蛋白,該蛋白由兩個富含半胱氨酸殘基的類呋喃結構域和一個I型血小板反應蛋白(thrombospondin)結構域組織[1]。RSPO1作為經典Wnt信號通路(canonical Wnt pathway)的激活劑,在生殖器官發育、上皮干細胞更新和癌癥的誘導與抑制等方面至關重要。

2、RSPO1的信號傳導機制

Spondin家族是近年來發現的一種重要的Wnt激活劑,由四種分泌蛋白(RSPO1-4)組成,其序列相似度為40%-60%[2]。研究表明, Wnt配體和受體卷曲蛋白質(frizzled, Fzd)結合能夠激活Wnt信號;然后,低密度脂蛋白受體相關蛋白5/6(low density lipoprotein receptor related protein 5/6, LRP5/6)會被磷酸化,從而促進下游信號通路的激活[3]。然而,細胞膜上除Fzd和LRP5/6等有利于Wnt信號傳導的受體外,E3泛素連接酶RNF43(ring finger protein43)和ZNRF3( zinc and ring finger 3)與Fzd結合則會導致其泛素化降解,從而弱化Wnt信號的傳導。RSPO1作為Wnt信號網絡的增強子,其FLD區域可通過與G蛋白質偶聯受體4/5( G-protein-coupled receptors, Lgr4/5)結合,進而連接RNF43和ZNRF3的胞外區域,使得膜上RNF43和ZNRF3被胞膜內吞,消除其泛素化降解作用,最終增強Wnt信號的傳導。

RSPO1與膜蛋白質結合啟動Wnt/β-catenin信號通路的作用機制

圖. RSPO1與膜蛋白質結合啟動Wnt/β-catenin信號通路的作用機制 [4,5]

3、RSPO1在疾病中的作用

3.1 RSPO1和性反轉綜合征 ( sex reversal syndrome, SRS)

性反轉綜合征主要表現為患者染色體性別與性腺性別不相符。46,XX 男性,是指無 Y 染色體但有睪丸發育的個體。RSPO1基因是除 SRY 基因外第一個被報道,單獨由一個基因的突變即可導致完全性 46,XX 男性的基因。

3.2 RSPO1和粘膜炎

口腔粘膜炎經常伴隨在頭部和頸部腫瘤癌癥患者的化療和放療過程中。研究證明,給予正常小鼠RSPO1會引發β-catenin核易位,導致舌基底層細胞增多,黏膜增厚,舌上皮細胞增殖加快。口腔黏膜已被確定作為RSPO1的一個靶標組織。[6]

3.3 RSPO1和骨丟失

骨丟失,是指在失重環境中,作用于人體腿骨、脊椎骨等承重骨的壓力驟減,肌肉運動減少,對骨骼的刺激減弱,骨骼血液供應相對減少,導致骨質脫鈣,引起骨質疏松等癥狀。近期有研究表明,RSPO1是骨形成的機械力敏感蛋白,可通過激活Wnt/β-catenin信號通路促進CMS(循環機械拉伸應力)下BMSCs(骨髓間充質干細胞)的成骨,緩解骨丟失。此外,證據表明RSPO1/Lgr4可能是未來防治廢用性骨質疏松的一個新的潛在靶點[7]

3.4 RSPO1和腫瘤

過去的研究證明,RSPO1基因發生插入突變,可導致掌跖角化過度患者伴隨產生皮膚鱗狀細胞癌和精原細胞瘤等癥狀 [8]。另有發現,RSPO1在卵巢癌中高表達,且通過活化Wnt/β-catenin信號通路在卵巢癌進展及耐藥中起重要作用 [9]。此外,RSPO1可顯著促進腸癌細胞的生長和增殖,并與結直腸癌的侵襲轉移能力相關 [10]。在研究乳腺浸潤性導管癌的發病機制時,發現 RSPO1 蛋白是一個潛在的預示乳腺浸潤性導管癌發病的標志,在導管癌發病過程中可通過相應的信號通路發揮其保護作用 [11]。同時,在最近的研究中還觀察到,RSPO1表達水平與患者放療后血紅蛋白,血小板和嗜中性粒細胞的發病率評分呈負相關,是預測宮頸癌晚期患者預后的有潛力的指標,但其具體作用機制還尚未明確。

3.5 RSPO1與類器官

類器官作為一種革命性疾病模型,在干細胞與發育、再生醫學、疾病研究、藥物開發和精準醫療等多個領域都有廣泛的應用前景。2021年“十四五”計劃將類器官列為首批重點專項。類器官如此火熱,其獲得方式成為目前關注的焦點。RSPO1作為經典Wnt信號通路的激活因子,是類器官培養基的關鍵成分,支持著類器官的分化。

4、RSPO1的臨床前景

目前對于RSPO1在腫瘤中作用的研究尚處于起步階段,大部分研究還停留在腫瘤組織、細胞及動物實驗上,對其在分子水平上的認識仍十分有限。鑒于Wnt信號可以作為藥物開發的目標,繼續拓展體內外實驗、探討RSPO1如何調控經典Wnt信號活性以及和其他調控因子的聯系,有助于進一步探索相關腫瘤的發生、發展機制以及提供腫瘤治療過程中更豐富的靶點選擇。

此外,RSPO1作為類器官培養中最經典的細胞因子培養方案中的重要組成,其高活性、批次間穩定和無污染是類器官實驗成功的關鍵,所以高質量的細胞因子對于類器官的培養必不可少!

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Recombinant Human R-spondin-1(RSPO1),partial (Active)

High Purity Validated by Western Blot (WB)

The purity was greater than 95% as determined by SDS-PAGE. (Tris-Glycine gel) Discontinuous SDS-PAGE (reduced) with 5% enrichment gel and 15% separation gel.

Excellent Bioactivity Validated by Functional ELISA

Immobilized human RSPO1 at 2 μg/ml can bind can bind Human LGR5(CSB-MP012906HU1), the EC50 is 124.0-174.1 ng/mL.

參考文獻:

[1] Cheng X X, Yang Q Y, Qi Y L, et al. Apoptosis of mesenchymal stem cells is regulated by RSPO1 via the Wnt/β-catenin signaling pathway[J]. Chronic Diseases and Translational Medicine, 2019, 5(1): 53-63.

[2] Li J Y, Wu X Y, Lee A, et al. Altered R-spondin 1/CART neurocircuit in the hypothalamus contributes to hyperphagia in diabetes[J]. Neurophysiol, 2019,121 (3): 928–939.

[3] Croce J C, McClay D R. Evolution of the Wnt pathways [J]. Methods in Molecular Biology, 2008, 469: 3-18.

[4] Parma P, Radi O, Vidal V, et al. R-spondin1 is essential in sex determination, skin differentiation and malignancy[J]. Nature genetics, 2006, 38(11): 1304-9.

[5] De Lau W B M, Snel B, Clevers H C. The R-spondin protein family.[J]. Genome biology, 2012, 13(3): 242.

[6] Zhao J S, Kim K A, De Vera J, et al. R-Spondin1 Protects Mice from Chemotherapy or Radiation-Induced Oral Mucositis through the Canonical Wnt/β-Catenin Pathway[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2009, 106(7): 2331-6.

[7] Shi G X, Zheng X F, Zhu C, et al. Evidence of the Role of R-Spondin 1 and Its Receptor Lgr4 in the Transmission of Mechanical Stimuli to Biological Signals for Bone Formation[J]. International Journal of Molecular Sciences, 2017, 18(3): 564.

[8] Kenichi N. R-spondin signaling as a pivotal regulator of tissue development and homeostasis[J]. Japanese Dental Science Review, 2019, 55(1): 80-87.

[9] Liu Q, Zhao Y, Xing H, et al. The role of R-spondin 1 through activating Wnt/β-catenin in the growth,survival and migration of ovarian cancer cells[J]. Gene, 2019, 689: 124-130.

[10] Ye J, Liu S X, Shang Y Y, et al. R-spondin1/Wnt-enhanced Ascl2 autoregulation controls the self-renewal of colorectal cancer progenitor cells[J]. Cell Cycle, 2018, 17(8): 1014-1025.

[11] Choi E J, Yun J A, Jeon E K, et al. Prognostic significance of RSPO1, WNT1, P16, WT1, and SDC1 expressions in invasive ductal carcinoma of the breast[J]. World Journal of Surgical Oncology, 2013, 11(1): 314-322.


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