CLDN6：癌癥治療新寵，晚期實體瘤患者的福音
日期：2024-10-31 15:39:00
2024年9月，第一三共發布了DS-9606的I期臨床試驗結果。DS-9606是一種基于ADC平臺開發的靶向CLDN6的抗體偶聯藥物，在I期臨床試驗的劑量遞增階段顯示出對已知表達CLDN6的晚期實體瘤患者良好的臨床活性和耐受性，未觀察到劑量限制性毒性，且在≥0.072 mg/kg劑量組中有4例患者達到確認的客觀緩解，研究結果令人鼓舞，將繼續推進以確定劑量擴展階段的推薦劑量，并進一步評估其在晚期實體瘤中的療效。
CLDN6作為Claudins家族的一員，被認為是繼CLDN 18.2之后，下一個癌癥治療的“新寵”
1、Claudins家族的發現
Claudins（CLDNs）蛋白家族最早在1998年由Furuse Mikio等人從雞肝中克隆得到并為之命名，是緊密連接（Tight junctions，TJs）的重要組成部分 [1-2]。緊密連接主要由occludin，CLDNs，緊密連接黏附分子構成。在哺乳動物中，迄今為止發現了27個Claudins成員，隨著研究的深入，Claudins家族成員還將不斷壯大 [3-4]。大量研究已證實，Claudins家族是TJs必不可少的骨架蛋白，在維持上皮和內皮細胞中的細胞極性、細胞間的粘附固定、細胞旁路的離子運輸等方面發揮重要作用 [5-8]。
Claudins成員，廣泛分布于不同的組織器官中，其表達具有多樣化的特性。近年來的大量研究數據揭示，Claudins的異常表達與多種腫瘤相關，涌現出更多的Claudins家族潛力靶點，用于腫瘤臨床診斷和治療（圖1） [9]。不僅在癌癥中扮演重要角色，也同其它疾病息息相關。例如，CLDN1的異常表達可導致硬化性膽管炎和魚鱗病 [10-11]；CLDN3的增加與肺泡屏障功能降低有關 [12]。在癌癥免疫治療領域，Claudins家族成員CLDN18的異構體CLDN18.2，已成為藥企必爭靶點的高地（點擊查看CLDN18.2相關文章）。如今，CLDN6作為Claudins家族“新寵”，腫瘤靶向藥物的研發也是勢如破竹，令人期待！
圖1. Claudins靶向藥物的臨床應用 [9]
2、什么是CLDN6？
CLDN6作為27個CLDN家族成員之一，是組成細胞間緊密連接的重要分子。CLDN6位于染色體16p3.3，分子量大約20-40kDa。Claudins成員之間具有相似的結構，每個Claudin分子有4個跨膜結構域，2個細胞外環和2條胞內尾區。CLDN6擁有一個C端的PDZ結合位點，使得緊密連接蛋白能與細胞內某些蛋白發生相互作用關系，在細胞連接及上皮組織通透性等方面均可發揮重要作用（圖2） [13]。對CLDN6蛋白質分子結構的研究是進一步了解CLDN6分子特性和功能的前提和基礎，目前關于CLDN6的高級結構的研究尚處于初級階段。然而值得關注的是，越來越多的研究表明，CLDN6異常表達可參與乳腺癌 [14]，卵巢癌 [15]，宮頸癌 [16]，胃癌 [17]，肺癌 [18]等多種惡性腫瘤發生及發展過程。
由于腫瘤細胞易于侵襲轉移，細胞之間結構較正常細胞排列錯亂，導致細胞信號因子或者藥物在流動過程中阻力增加，難以突破細胞間的屏障到達腫瘤細胞內，抗腫瘤藥物無法髙效發揮作用。因此，探索打開細胞緊密連接，為抗腫瘤藥物以及正常信號通路的轉導清除障礙，成為腫瘤治療中的新思路。CLDN6作為細胞骨架的形成和細胞信號通路調節的重要分子，可影響細胞的生長進程，這為腫瘤的診斷和干預提供了新的方向。目前，多款針對CLDN6的藥物已處于臨床和臨床前階段，用于多種腫瘤的治療。
圖2. CLDNs家族結構示意圖 [13]
3、CLDN6相關的信號通路
目前的研究普遍認為，CLDN蛋白表達升高或降低，磷酸化及去磷酸化，都會導致一定程度的細胞極性缺失和細胞間分子異常擴散等變化，而此種變化的主要原因則是由于緊密連接正常結構的破壞而引發的。另外，CLDN蛋白可能是通過高度特異性的胞內信號通路所起作用的，但目前絕大多數CLDN蛋白在腫瘤中的作用機制尚不清楚。大量研究表明，CLDN6基因可能直接或間接參與腫瘤細胞增殖、分化、凋亡等功能的調節 [19]。
CLDN6可以通過不同的信號通路參與細胞調控，其復雜多樣的分子機制有待進一步闡明。比如，在宮頸癌細胞中，CLDN6的PDZ結合基序可以募集具有PDZ結構域的蛋白AF-6，AF-6與Ras結合，抑制Ras和Raf的結合，使得Ras不能被Raf激活，從而抑制Ras的活性，進一步抑制下游靶分子如ERK和PI3K等信號通路，以調控細胞生物學行為 [13]。在乳腺癌中，過表達CLND6可以激活ASK1/P38通路，從而誘導細胞凋亡 （圖3）；在肺腺癌中，CLDN6過表達細胞，可促進P38 MAPK途徑的活化 [14] ；在結直腸癌中，CLDN6通過與ZO-1結合，調控PTEN/AKT信號通路，抑制腫瘤 [20]；在卵巢癌中，CLDN6通過ASK1參與細胞凋亡，進而介導MAPK信號通路發揮作用 [15]。
圖3. CLDN6激活RIP1-ASK1-p38/JNK MAPK [19]
4、CLDN6在腫瘤等疾病中的作用
CLDN6等家族蛋白，在上皮細胞和內皮細胞緊密連接的形成過程中起了重要作用。CLDN家族通過細胞屏障、細胞旁路轉運和信號轉導保持了細胞內環境的平衡。CLDN6等家族蛋白的異常表達，可使得TJs功能受損，屏障功能降低，從而導致組織通透性提高，最終導致包括遺傳性、過敏性疾病，各個系統感染性疾病乃至腫瘤等多種疾病的發生。目前，關于CLDN6的研究，主要集中在腫瘤，尤其是卵巢癌，乳腺癌，宮頸癌。
4.1 CLDN6和腫瘤
在一項產氣莢膜梭菌腸毒素（CPE）結合CLDN6調控卵巢癌的研究數據顯示，CLDN6在卵巢癌中高表達，CPE可加速卵巢癌細胞裂解；CLDN6編碼基因的敲除，可降低CPE高敏感株對CPE的敏感度，使得CPE無法破壞腫瘤細胞，導致腫瘤增殖；而CLDN6過表達，可增加抗CPE細胞株對CPE的敏感度，促使腫瘤細胞裂解 [21]。在人乳腺癌細胞系中CLDN6低表達，當過表達CLDN6時，MDA-MB-231細胞的運動性顯著降低，并顯示出侵襲性降低，緊密連接功能隨著菌落變得更緊密而增強；進一步數據顯示，CLDN6的高表達，可導致Sp1和cyclin D1的表達下調 [22-23]；另有研究表明，過表達CLDN6的宮頸癌細胞中，促凋亡蛋白Bax增多，抑凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl減少，這提示，CLDN6具有促進宮頸癌細胞凋亡的作用 [13, 24]。因此，CLDN6有望為卵巢癌等腫瘤靶向治療提供新方向。
4.2 CLDN6和多卵巢綜合征等疾病
有研究證實，CLDN6在多囊卵巢綜合征（Polycystic Ovary Syndrome，PCOS）和顆粒細胞（Granular Cells，GC）中呈高表達，減弱CLDN6表達，可抑制PCOS大鼠卵巢GC增殖并誘導GC凋亡 [25, 26]。PCOS以月經稀發、高雄激素血癥、卵巢多囊樣改變為主要特征，影響全球5%~20%的育齡婦女。患有PCOS的女性中，GC異常增殖，并與卵巢內雄激素的過量產生有關。另有研究報道，抑制CLDN6表達，可抑制子宮內膜異位癥細胞增殖、遷移及侵襲。子宮內膜異位癥是臨床常見婦科疾病且育齡女性的發病率較高，患者常有月經量過多、痛經等癥狀。以上研究意味著，CLDN6可能作為治療PCOS或子宮內膜異位癥的潛在靶點。
5、CLDN6臨床研究進展
來自ParmSnap數據庫顯示，已有10多家企業布局CLDN6研發管線，集中在CLDN6抗體、ADC、雙特異性抗體、CART（參見下表）。具體來看，針對CLDN6藥物進展較快的，來自日本安斯泰來制藥（Astellas Pharma Global Development, Inc.）旗下的IMAB-027抗體藥物，為靶向CLDN6的抑制劑，已處于臨床二期，適應癥包括生殖細胞和胚胎腫瘤、睪丸腫瘤、卵巢癌，但尚未查到該項目的2期臨床數據。
安進公司的AMG 794雙特異性抗體，靶向CD3 x CLDN6，處于臨床1期，適應癥為卵巢上皮癌、非小細胞肺癌，以及非鱗狀非小細胞肺癌。在2022 AACR會議上，安進公司披露AMG 794對表達CLDN6的非小細胞肺癌和上皮性卵巢癌細胞，具有可接受的臨床前安全性數據，支持AMG 794進入臨床開發。
德國拜恩泰科公司旗下有三款管線藥物在研BNT 211（臨床2期）、BNT-142（臨床1/2期）和CARVac Claudin6 mRNA vaccine（臨床1期）。在AACR會議上，德國拜恩泰科披露了BNT211 CAR-T+CARVac聯合治療CLDN6陽性實體瘤的臨床初步數據，在16名接受治療患者中，CLDN6 CAR-T治療具有良好的耐受性，疾病控制率達到86%，客觀緩解率ORR為43%。
另外，4款雙特異性抗體藥物尚處于臨床前階段，分別來自Context Therapeutics LLC（CLDN6 x CD3），Novarock Biotherapeutics Ltd.（NBL-028；TNFRSF9 x CLDN6），天境生物（TJ-C64B；TNFRSF9 x CLDN6）、Integral Molecular, Inc.聯合Context Therapeutics LLC（IM-171，CLDN6 x CD3）。其中Novarock為石藥集團的附屬公司，旗下的NBL-028的臨床前數據表明，NBL-028在小鼠模型中能夠有效抑制腫瘤并誘導免疫記憶的形成，且未檢測到肝損傷或全身毒性的跡象。
隨著越來越多的對緊密連接蛋白家族研究，CLDNs家族與腫瘤相關的分子機制和藥物研究正成為熱點和重點。繼CLDN18.2之后，CLDN6同樣作為緊密連接蛋白關鍵成員，CLDN6異常表達在卵巢癌等多種惡性腫瘤中扮演重要角色，尤其婦科腫瘤。利用CLDN6的空間結構和調節特點，尋找或設計針對CLDN6靶向藥物，去主動調控CLDN6的信號轉導，干擾腫瘤的進程，對于卵巢癌等腫瘤的早期診斷和精準治療具有重要的價值！
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● Recombinant Human Claudin-6(CLDN6)-VLPs (Active)
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The specifity was validated by western blot. CSB-MP005508HU(A4) is detected by Mouse anti-6*His monoclonal antibody.
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Immobilized Human CLDN6 at 10 μg/ml can bind Anti-CLDN6/9 recombinant antibody (CSB-RA005508MA1HU), the EC50 is 1.501-2.035 ng/mL
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The presence of VLP-like structures was confirmed by TEM
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