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GUCY2C:平衡性的“守護者”,帶來結直腸癌免疫治療新曙光

日期:2022-04-26 11:00:59

2022年4月19日,上海斯丹賽生物公司宣布,其開發的實體瘤CAR-T產品GCC19CART獲得美國(FDA)快速通道資格。GCC19CART是一款基于斯丹賽生物自主研發的實體瘤通用的CoupledCAR®技術平臺的CAR-T細胞療法,通過靶向GUCY2C以治療復發難治轉移型結直腸癌(R/R mCRC) [1]。這款療法計劃于2022年中在美國啟動I期臨床試驗。此前,GCC19CART在中國進行的概念驗證(PoC)人體試驗中取得了積極的結果。此外,輝瑞的GUCY2C/CD3雙特異性抗體,也正在國外做臨床前研究 [2]。近年來,GUCY2C在腫瘤免疫治療中展現出極大的潛力,尤其是CRC CAR-T免疫治療。那么,GUCY2C是什么?GUCY2C在結直腸癌免疫治療中的進展如何?一起來了解一下。

1、GUCY2C的結構及其功能

鳥苷酸環化酶C (guanylyl cyclase C, GUCY2C/GCC)屬于受體鳥苷酸環化酶家族中的一員 [3, 4]。該酶是細菌熱穩定腸毒素的腸道受體,所以GUCY2C又稱為熱穩定腸毒素受體。人GUCY2C基因定位于染色體12q12,其編碼產物為一種I型跨膜蛋白,分子量約為120 kDa [5]。GUCY2C蛋白結構主要由5部分組成:①胞外N末端受體結合區。含40%的自身蛋白,可結合特定的配體;②疏水的跨膜區,將胞外信息傳入胞內;③胞質區,即激酶同源區,將信號從結合了配體的受體區轉至催化區;④催化區;⑤羧基末端 [6, 7] 圖1)。大量研究表明,鳥苷酸環化酶C的激活可刺激胞內第二信使--環磷酸鳥苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)的產生,起到調節體內穩態、維持腸道屏障功能、發揮抗炎活性等作用 [8]

GUCY2C結構

圖1. GUCY2C結構

在正常人機體組織中,GUCY2C主要表達于腸上皮細胞,在腸外組織和腫瘤中不表達。GUCY2C參與的信號轉導通路可調節腸道內水和電解質的平衡 [6]。近年來研究發現,GUCY2C在原發性結直腸癌細胞中穩定表達,而在轉移性結直腸癌細胞中,GUCY2C異常高表達,被認為是轉移性結直腸癌的特異性標志分子 [9]。另有數據表明,GUCY2C在胰腺癌、胃癌和食道癌中表達 [5, 10],提示GUCY2C或可作為這些疾病的潛力靶標。

2、GUCY2C的配體

鳥苷素(guanylin,Gn)和尿鳥苷素(uroguanylin,Ugn)是GUCY2C內源性配體,在人體許多組織器官中都有表達,如腸道、腎、心臟、肺、子宮、卵巢等,其中,在腸道和腎臟的表達尤為豐富 [11]。熱穩定性腸毒素(heat-stable enterotoxin,STa)是GUCY2C的外源性配體,由產腸毒素大腸桿菌產生 [12]。如圖2所示,Gn和Ugn與細菌STa結構相似,都在肽鏈中含有豐富的半胱氨酸和二硫鍵,這是它們發揮生物學功能所必須的結構。其二硫鍵數量將GUCY2C的配體分成2類:2個二硫鍵的Gn和Ugn;3個二硫鍵的STa [7]。半胱氨酸和二硫鍵數目的不同決定它們生物學功能上的差異 [13]。有數據表明,Gn、Ugn和STa均可抑制腸道對液體和鹽的吸收,但抑制能力有明顯的不同 [13]。當這些配體(Gn/Ugn/STa)與腸上皮細胞的GUCY2C受體結合后,能激活GUCY2C,使GUCY2C受體具有鳥苷酸環化酶活性,從而發揮生物學效應。此外,Gn、Ugn和STa在蛋白質序列和構象的差異,導致它們同GUCY2C受體結合的親和力不同,激活GUCY2C受體的能力也不同 [13]

GUCY2C的配體

圖2. GUCY2C的配體

3、GUCY2C介導的信號轉導通路

目前研究表明,GUCY2C通常參與細胞膜離子通道的開啟,從而調節細胞內外正常的離子濃度和腸道水電解質平衡,促進腸道的消化吸收,維持腸道功能,保護腸道屏障的完整性。如圖3所示,GUCY2C同配體(Gn/Ugn/STa)結合后,GUCY2C激活,介導GTP轉化為cGMP,胞內的cGMP濃度增加,導致下游效應器的激活,包括依賴cGMP的蛋白激酶PKGs、磷酸二酯酶PDEs和環核苷酸門控離子(CNG),這一系列信號分子的激活與人體代謝機制密切相關。比如,當GUCY2C誘導的蛋白激酶G II(PKG II)活化時,可磷酸化囊性纖維化跨膜傳導調節因子(CFTR)。CFTR經磷酸化后,誘導氯離子等經胞內向胞外流動。有研究表明,當GUCY2C配體缺失時,GUCY2C異常高表達,將導致結直腸上皮細胞穩態失衡,可引起腸道上皮細胞連接形成的腸道屏障被破壞,促進腸道腫瘤的發生,但其具體的調節機制有待進一步闡明 [14]

GUCY2C介導的信號轉導通路

圖3. GUCY2C介導的信號轉導通路

4、GUCY2C在疾病中的作用

GUCY2C受鳥苷素、尿鳥苷素和熱穩定性腸毒素的激活,可調節腸道水、電解質的動態平衡和腸上皮細胞轉變和增殖。目前研究發現,GUCY2C主要與腸道疾病相關,以及較少報道的神經疾病。其中,腸道類相關的疾病主要包括功能性胃腸病(例如過敏性腸綜合癥,便秘,或酸度過量等)、炎癥性腸病(例如克羅恩病和潰瘍性結腸炎等)、癌癥(例如胃腸道癌癥)。

在腸道疾病方面,有研究提示,GUCY2C的活化突變,可使腸道環境發生變化,從而導致腸道菌群改變并增加克羅恩病的易感性 [15]。另有報道,GUCY2C與先天性失鈉性腹瀉有關,且家族性GUCY2C腹瀉綜合癥可在成年后發展為炎癥性腸病 [16]。在神經系統疾病方面,有研究表明GUCY2C選擇性地表達于中腦多巴胺神經元上,并以獨特的生理機制調控動物的注意力和運動水平 [17]

在胃腸道腫瘤方面,GUCY2C在大腸癌患者外周血中具有較高的陽性表達率,提示GUCY2C在大腸癌復發或轉移病例中,可作為患者術后復發和轉移的早期檢測指標 [18]。另有研究表明,GUCY2C在胃黏膜腸上皮化生、異型增生及胃癌中高表達 [19]。也有報道,GUCY2C是一種區分原發性和轉移性卵巢黏液瘤較特異的標志物 [20]。值得關注的是,大量研究提示,GUCY2C在結腸癌變的早期階段,常出現表達異常 [21, 22]。有研究數據表明,在轉移性結直腸癌細胞中,GUCY2C特異性高表達,其作為結直腸癌的分子標志物潛力巨大 [23]

5、GUCY2C靶向治療及臨床前景

GUCY2C作為CAR-T近期熱門研究靶點,國內上海斯丹賽生物技術有限公司的GUCY2C CAR-T 細胞療法剛被授予FDA快速通道資格,有望很快在美國進行I期臨床。事實上,已有早期臨床試驗表明,在甲狀腺癌或結腸直腸癌患者中,GUCY2C CAR-T治療顯著抑制了腫瘤生長,其療效顯著。基于GUCY2C的免疫治療,早前輝瑞的GUCY2C/CD3雙特異性抗體PF-07062119臨床前研究結果就已證實,GUCY2C在結直腸癌(CRC)中的抗腫瘤活性,且毒性可控。此外,PF-07062119與抗PD-1/PD-L1治療聯合使用,可增強抗腫瘤活性。另有報道,美國的托馬斯杰斐遜大學和Sidney Kimmel癌癥中心科研團隊開發了專門針對結直腸癌的疫苗Ad5-GUCY2C-PADRE,將GUCY2C分子與增強免疫反應的分子PADRE連接起來,并將其加載到腺病毒載體中。臨床前研究表明,該疫苗可激活CD8+T細胞產生免疫應答,預防結直腸癌轉移 [24]

不管是疫苗或CAR-T細胞等免疫療法,新療法的出現必將給結直腸癌在內的胃腸道惡性腫瘤的治療帶來新的希望。GUCY2C作為腸道信號系統中的重要一員,以GUCY2C為作用靶點的研究強調了GUCY2C在結直腸癌中扮演的重要角色,而將GUCY2C CAR-T或疫苗應用到結直腸癌治療更是重大突破,這對于CRC患者的治療將具有重大意義。

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Recombinant Human Heat-stable enterotoxin receptor (GUCY2C),partial (Active)

High Purity Validated by Western Blot (WB)

The purity was greater than 94.8% as determined by SDS-PAGE. (Tris-Glycine gel) Discontinuous SDS-PAGE (reduced) with 5% enrichment gel and 15% separation gel.

Excellent Bioactivity Validated by Functional ELISA

Immobilized human GUCY2C at 5 μg/ml can bind Anti-GUCY2C recombinant antibody (CSB-RA010053A2HU), the EC50 is 3.049-4.660 ng/mL.

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The purity was greater than 95% as determined by SDS-PAGE. (Tris-Glycine gel) Discontinuous SDS-PAGE (reduced) with 5% enrichment gel and 15% separation gel.

Excellent Bioactivity Validated by Functional ELISA

Immobilized human GUCY2C at 5 μg/ml can bind Anti-GUCY2C recombinant antibody (CSB-RA010053A2HU), the EC50 is 11.89-24.13 ng/mL.

參考文獻:

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