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PD-1——重要的免疫檢查點

日期:2019-11-19 14:52:03

程序性死亡分子(Programmed death-1, PD-1)又名CD279,是繼CTLA4發現之后又一個重要的負性共刺激分子。它的配體PD-L1,又名CD274,同屬CD28/B7超家族。PD-1與其配體結合后,傳導的負性共刺激信號能抑制T淋巴細胞增殖,在調節T細胞活化和免疫耐受過程中發揮關鍵作用,對防止自身免疫病的發生、發展起重要作用。


1. PD-1的結構

PD-1是在T細胞雜交瘤細胞株進行活化誘導的細胞程序性死亡過程中被發現,因此得名[1],屬B7-CD28家族成員之一。

PD-1基因位于人類染色體2q37上,所編碼的蛋白是一種相對分子質量為50 kDa-55 kDa的I型跨膜糖蛋白,由于缺乏在近膜處能形成同源二聚體的半胱氨酸,以單體形式表達于細胞膜表面。

PD-1蛋白由胞外區、跨膜區和胞內區組成。

其中,胞外區含有一個免疫球蛋白可變區結構域。PD-1胞內區含有免疫受體酪氨酸抑制基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif, ITIM)及免疫受體酪氨酸轉換基序(immunoreceptor tyrosine-based Switch motif, ITSM),這兩種基序各含有1個酪氨酸。

當PD-1與其配體結合時,兩個酪氨酸均發生磷酸化,但是ITIM并不轉導PD-1信號通路的抑制信號,只有ITSM的C末端酪氨酸的磷酸化可使PD-1發揮調控作用。


2. PD-1的表達

PD-1主要在活化的CD4+ 和CD8+ T細胞,活化B細胞、自然殺傷(NK)細胞、自然殺傷T細胞、樹突細胞(DC)及活化的單核細胞中表達,并與它們的分化和凋亡密切相關。

PD-1的表達可被TCR或B細胞受體誘導,腫瘤壞死因子可增強PD-1的表達。

PD-1的廣泛表達提示其在維持機體負性免疫應答中具有必不可少的作用。


3. PD-1的配體

PD-1的配體主要有PD-L1和PD-L2,其中PD-L1是主要配體[2],在多種惡性腫瘤中高表達。

PD-1的配體

圖1. PD-1的配體

3.1 PD-L1

PD-L1(B7-H1、CD274)是PD-1的配體,該基因位于人類染色體9p24。

它是由Dong等[3]于1999年發現的,是B7家族的新成員。

3.1.1 PD-L1的結構

PD-L1是一種40kDa的I型跨膜糖蛋白,由胞外段、疏水跨膜段和短的胞質結構域組成。

胞膜外區有1個免疫球蛋白恒定區(IgC)結構域和1個免疫球蛋白可變區(IgV)結構域。PD-L1細胞質區含有一個蛋白激酶C磷酸化位點,但胞內區的信號轉導基序目前尚不明確。

3.1.2 PD-L1的表達

CD274在心臟、骨骼肌、胎盤和肺中高表達,在胸腺、脾臟、腎臟和肝臟中弱表達。PD-L1表達于T細胞、B細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞、間質干細胞和培養的骨髓衍生肥大細胞上,且在活化后的細胞上表達明顯上調。

在非造血系統中,PD-L1表達于血管內皮細胞、上皮細胞、成纖維細胞網狀細胞、胰島細胞、骨骼肌細胞、胚胎滋養層細胞、星形膠質細胞、肝細胞、胎盤,視網膜色素上皮細胞等。

PD-L1在多種腫瘤細胞中表達,如人肺癌、卵巢癌、結腸癌、腎癌和黑色素瘤等。

3.2 PD-L2

PD-L2是由Freeman實驗室鑒定出來的[4]。人PD-L2(B7-H2、CD273)基因同樣位于染色體9p24,編碼247個氨基酸的I型跨膜蛋白。PD-L1和PD-L2兩者的同源性為40%。PD-L2與PD-1的親和力是PD-L1的2~6倍。

與PD-L1相比,PD-L2的表達相對較局限,PD-L2誘導性表達于樹突細胞、巨噬細胞、骨髓來源肥大細胞等細胞表面[5] [6]。人的PD-L2也表達在血管內皮細胞上。


4. PD-L1/PD-1信號通路

PD-1與其配體PD-L1結合后,PD-1胞質區ITSM結構域中的酪氨酸發生磷酸化,招募SHP2磷酸酶類分子至胞膜內側[7],發揮對下游信號的負調控,進一步抑制PI3K/PKB介導的Zap-70/CD3ζ和PKCθ磷酸化,抑制T細胞增殖、分化和細胞因子產生[8] [9]

PD-L1/PD-1信號通路

圖2. PD-L1/PD-1信號通路

4.1 PD-1/PD-L1信號通路的功能

IFN-γ上調正常組織細胞和不同腫瘤組織細胞表面的PD-L1,通過誘導PD-L1表達來下調腫瘤微環境的免疫應答。PD-1在T細胞受到炎癥信號刺激后被誘導產生,并且在以感染和腫瘤為主的多種外周組織中限制T細胞的功能,由此可限制免疫反應的放大和持續時間,從而避免正常組織的損傷。

雖然PD-L1和PD-1上調的生理功能是為了避免炎癥擴大,降低組織損傷,但是腫瘤微環境中誘導產生的PD-L1會促進活化的T細胞凋亡,也會刺激人外周血T細胞產生IL-10來調節免疫抑制。

PD-1/PD-L1的相互作用在體內抑制T細胞方面起到重要作用。PD-L1與T細胞膜上的受體PD-1結合產生抑制信號,可阻止CD4+T細胞、CD8+T細胞增殖、活化,下調一些抗凋亡分子和促炎因子的表達,改變腫瘤微環境,使機體對腫瘤細胞的監視及清除能力減弱,產生免疫逃逸,從而讓腫瘤細胞能在機體內無限增殖[10]。因此,阻斷PD-1/PD-L1通路可以恢復免疫系統對腫瘤細胞的殺傷作用。

4.2 PD-1/PD-L1信號通路與疾病

PD-1與其主要配體PD-L1結合形成PD-1/PD-L1信號通路,該信號通路在維持外周耐受和調節抗原特異性T細胞活性及其介導的炎癥性疾病中發揮著重要的作用,是感染性疾病慢性化和自身免疫性疾病的重要影響因素。

PD-1/PD-L通路對自身免疫性疾病和移植排斥反應有積極的調控作用,但在抗病毒、抗腫瘤方面則起到消極的作用。

4.2.1 PD-1/PD-L1信號通路與慢性病毒感染

病毒感染可導致抗原特異性T細胞表面PD-1、PD-L1表達升高,抑制CD4+和CD8+T細胞的增殖,減少細胞因子白細胞介素2(IL-2)、干擾素γ(IFN-γ)分泌或擴散,引起特異性T淋巴細胞免疫功能降低,甚至衰竭。這削弱宿主的抗感染免疫反應,導致靶器官損傷,最終引起病毒持續感染等相關疾病的發生。這表明PD-1/PD-L1通路可能是慢性病毒感染以及疾病慢性化的主要原因之一。

PD-1/PD-L通路被證實與HIV、HBV、HCV感染[11]等T細胞相關的慢性病毒感染有關。

在慢性病毒感染中,用抗體阻滯PD-1,CD8+T細胞能重新活化、增殖和分化,并恢復其殺病毒能力,使病毒滴度下降[12]

4.2.2 PD-1/PD-L與自身免疫病

作為一個關鍵的共抑制分子,PD-1的基因多態性與自身免疫病的易感性存在聯系,表明PD-1可能在自身免疫病的發生和發展中起重要作用[13]

  • 系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)

這是一類系統性自身免疫病。研究發現[14],PD-1基因在人染色體上的位點恰好是SLE發生的高敏感性候選位點。

PD-1基因位點頻率異常引起PD-1表達下降,從而使PD-1/PD-L信號通路調節異常而導致SLE發生。

PD-1的表達下降與PD-1.3A/G等位基因有關,可能是因為PD-1.3的基因多態性破壞了Runt相關蛋白1的DNA結合位點,使PD-1基因轉錄水平下降,引起T細胞等異常活化和增殖,從而誘導SLE發生。

  • PD-1/PD-L與類風濕性關節炎

類風濕性關節炎(RA)是一種慢性炎性自身免疫病,該疾病的基本病理特點為慢性滑膜炎和滑膜增生。

T細胞參與了RA發生,外周血T細胞的異常增殖分化啟動RA的發生,同時促進慢性炎性反應。

RA病人CD4+和CD8+T細胞表面表達的PD-1和血清中可溶性PD-1(soluble PD-1,sPD-1)的水平均降低[15]。這表明PD-1通過調節T細胞的活性參與了風濕性關節炎的發生。

4.2.3 PD-1/PD-L與腫瘤

在人體內,腫瘤組織上表達的抗原雖然可被宿主的T細胞識別,但不一定被清除。原因之一就是腫瘤微環境中PD-L1和PD-1的上調表達。PD-L1在腫瘤組織(如淋巴瘤、絨毛膜癌、黑色素瘤、食管癌)中的表達以及PD-1在腫瘤浸潤淋巴細胞上的表達上調參與了相關的免疫抑制信號傳導。

PD-1/PD-L1信號通路的激活抑制了CD4+T細胞、CD8+T細胞增殖、活化,抑制細胞因子的表達,改變腫瘤微環境,使機體對腫瘤細胞的監視及清除能力減弱,促進腫瘤細胞逃避機體免疫監視和殺傷[16]。因此,PD-1/PD-L通路成為治療腫瘤的新的作用靶點。

PD-1/PD-L1信號通路與腫瘤的關系

圖3. PD-1/PD-L1信號通路與腫瘤的關系


5. PD-1/PD-L在治療方面的應用

PD-1和PD-L1信號通路在感染免疫、腫瘤免疫、移植免疫中起著重要作用,這使得靶向PD-1/PD-L1信號通路成為治療腫瘤的研究熱點。

免疫檢查點阻滯劑PD-1/PD-L1抗體類藥物的研發是目前腫瘤治療領域的研究熱點。PD-1/PD-L1抗體作為腫瘤免疫治療方法之一,通過阻斷PD-1/PD-L1信號通路,逆轉腫瘤免疫微環境,增強內源性抗腫瘤免疫效應。

作用于PD-1/PD-L1信號通路的抗體分為兩類,包括抗PD-1抗體和抗PD-L1抗體。抗PD-1抗體能夠阻斷PD-1與PD-L1及PD-L2的相互作用,而抗PD-L1抗體僅能阻斷PD-1與PD-L1的相互作用,卻不能阻斷PD-1與PD-L2的相互作用。目前主要的抗PD-1/PD-1抗體有nivolumab、Pembrolizumab、ipidilizumab、(avelumab、atezolizumab和durvalumab)。其中nivolumab和pembrolizumab是PD-1抗體,avelumab、atezolizumab和durvalumab是PD-L1抗體。

Nivolumab已被批準用于非小細胞肺癌(NSCLC)、腎細胞癌(RCC)、膀胱癌(BC)、微衛星不穩定性或錯配修復缺陷(MSI-H/dMMR)的結直腸癌(CRC)、肝細胞癌(HCC)、經典霍奇金淋巴瘤(cHL)、黑色素瘤和頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)的治療。

Pembrolizumab已經被批準用于黑色素瘤、HNSCC、宮頸癌、cHL、NSCLC、BC、胃癌和胃食道癌,以及所有被歸類為MSI-H/dMMR的晚期實體腫瘤。

Avelumab已被批準用于治療默克爾細胞癌和BC。

Atezolizumab已經被批準用于NSCLC和膀胱癌。

Durvalumab已經被批準用于治療膀胱癌和NSCLC (III期)。

在黑色素瘤Ⅲ期臨床試驗中,PD-1抗體nivolumab和Pembrolizumab這兩種藥物的療效都得到了認可。此外,PD-1抗體在肺癌和卵巢癌也得到了應用。


6. PD-1抑制劑毒副反應

PD-1抑制劑雖然有驚人療效,但是也誘發了免疫相關的毒副反應(immune-related adverse events, irAEs)。

這可能與免疫檢查點通路維持人體免疫穩態的作用被破壞相關[17]。即通過靶向阻斷免疫檢查點等負調節因子,增強T細胞的活性,導致免疫過強化,在達到抗腫瘤效果的同時不可避免產生對正常組織的損傷。


PD-1蛋白

Recombinant Human Programmed cell death protein 1(PDCD1),partial (Active) (Code: CSB-MP619964HU1)

High Purity Validated by SDS-PAGE
CSB-MP619964HU1 SDS-PAGE

(Tris-Glycine gel) Discontinuous SDS-PAGE (reduced) with 5% enrichment gel and 15% separation gel.

Excellent Bioactivity Validated by Functional ELISA
High Purity Validated of CSB-MP619964HU1

Immobilized PD-1 at 2 μg/ml can bind Anti-PD-1 recombinant antibody, the EC50 of human PD-1 protein is 6.087-7.854 ng/ml.


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