南方醫科大學珠江醫院檢驗醫學部教授何肖龍老師和其團隊在《Cell host & microbe》雜志上發表了題為Gut microbial DL-endopeptidase alleviates Crohn's disease via the NOD2 pathway的論文，該研究表明菌群DL-內肽酶是產生NOD2配體的關鍵酶。

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作者分析了來自全球多個地區（中國、美國、荷蘭、西班牙）的857例宏基因組數據，發現DL-內肽酶基因豐度在克羅恩病中顯著降低，且與疾病活動度顯著負相關。在體內實驗層面，證實DL-內肽酶活性低的克羅恩病患者糞菌，移植至小鼠可顯著增加其腸炎易感性，該效應在NOD2敲除小鼠中消失。最后發現，直接補充DL-內肽酶、產DL-內肽酶益生菌或小分子NOD2激活劑，均能通過激活NOD2信號緩解小鼠腸炎。

圖1. 厚壁菌衍生的DL-內肽酶在腸道中產生NOD2配體，并且在CD患者中被完全吸收。

文獻來源：https://sciencedirect.53yu.com/science/article/pii/S193131282200395X

克羅恩病是一組腸黏膜非特異性慢性炎癥反應性疾病，因病情反復發作難以治愈，被稱為“綠色癌癥”。目前克羅恩病的治療主要采取抑制炎癥反應的策略，以激素、免疫抑制劑及生物制劑等一種或多種藥物聯合治療。這些藥物不可避免地產生諸多副反應，且單純抑制免疫反應難以改變潛在的腸道穩態失衡，導致病情容易反復，極大地影響了患者的生活質量及生存率。更為重要的是，持續反復的慢性炎癥還會增加結直腸癌的發病風險。因此，亟待開發治療克羅恩病的新治療方法。

核苷酸寡聚結構域 2 (NOD2)是一種經典的模式識別受體，通過識別特定的細菌肽聚糖片段（如胞壁酰二肽）而維持腸道穩態。NOD2基因突變是導致克羅恩病的最強遺傳風險因素。西方人群中近 50% 的家族性克羅恩病與三個突變相關，這些突變都會損害 NOD2 的配體識別。以上表明 NOD2 信號傳導在維持宿主穩態環境中起關鍵作用。除NOD2受體本身缺陷外，細菌來源的配體是否會缺乏，其缺乏是否會影響 NOD2 信號傳導而驅動克羅恩病很大程度上仍是未知的。

何肖龍團隊通過收集克羅恩病宏基因組公共數據，分析8種肽聚糖水解酶在健康對照和克羅恩病人糞菌中的豐度變化；利用培養組學、16S rRNA測序和宏基因組測序，結合NOD2報告細胞激活實驗，分析DL-內肽酶是否為產生NOD2配體的關鍵酶；通過糞菌移植和NOD2基因敲除小鼠，探索低DL-內肽酶活性的糞菌是否增加小鼠腸炎易感性，及該驅動腸炎作用是否依賴于NOD2通路。最后，利用DL-內肽酶、DL-內肽酶產物和自主分離的產DL-內肽酶益生菌，探索調控DL-內肽酶緩解腸炎的可行性。

圖2. DL-內肽酶活性的治療性恢復通過NOD2信號通路保護小鼠免受結腸炎

該研究中使用的小鼠試劑盒TNF-α（CSB-E04741m）；IFN-γ（CSB-E04578m）；IL-17 （CSB-E04608m）； IL-6（CSB-E04639m）均來自華美生物（CUSABIO）（圖2：M）。

該研究首次揭示除基因突變外，腸道菌群紊亂也是影響NOD2信號轉導的重要因素。另外，研究提示NOD2激活可能是傳統益生菌，如唾液乳桿菌，發揮療效的重要機制，在后續相關益生菌的臨床試驗中，需要考慮宿主基因型對益生菌療效的影響，糞便NOD2配體（如胞壁酰二肽等）也需要作為一個重要的結局觀測指標。