大化所血漿中內源性多肽的高選擇性富集與分離鑒定獲進展
日期：2011-12-21 08:55:10
血漿中多肽的分離鑒定對于疾病標志物的篩選和早期診斷具有重要意義。然而，血漿復雜的成分組成和多肽、蛋白質極高的含量動態范圍，對內源性多肽的高效富集和分離鑒定形成了巨大的困難。中科院大連化學物理研究所鄒漢法、吳仁安研究員等人采用該所張濤研究員研究組所制備的碳介孔材料(OMC)，成功發展了血漿中內源性多肽的高選擇性富集與分離鑒定的新方法。該項成果作為VIP論文發表在Angew. Chem. Int. Ed.（2011，50，12218-12221）。
碳介孔材料(OMC) 具有高度的有序性、孔分布和很強的疏水性表面，由于蛋白質等生物大分子(≥15000 Da）與多肽分子（≤10000 Da）的體積差異，通過體積排阻效應可以將蛋白質等生物大分子排阻在介孔外無法得到有效的吸附，而低分子量的多肽被可以進入介孔內獲得有效的吸附，從而在高度復雜的血漿中實現內源性多肽的高效率、高選擇性富集。
研究人員選擇BSA (bovine serum albumin）酶解的多肽作為標準樣品考察OMC的吸附性能，發現其富集多肽的效果與常用的C18固相萃取柱的吸附效果相當；但與C18固相萃取方法相比較，OMC富集方法進一步引入了體積排阻作用，能較好地消除血漿中蛋白質等生物大分子對多肽吸附的干擾。將所建立的富集方法應用于血清中內源性多肽的富集，所富集的多肽由多維色譜-高分辨質譜（2D LC-MS/MS）分離鑒定，可在3mL血清中鑒定到790個非冗余多肽，比現有的方法提高了2-3倍；進一步應用于20µl血清中內源性多肽的分離分析，共鑒定了3402個內源性血漿多肽，這是目前血清中內源肽的最高靈敏度的富集鑒定策略。
這一結果充分表明，OMC富集血清中的內源性多肽具有極高的效率，有利于實現微量樣品中多肽的高效、高選擇性分離鑒定。該新方法可以廣泛應用于其它生物樣品中多肽的分離鑒定，為闡明疾病發生的機制和標記物的發現提供了新的分析策略和途徑。
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