評估干細胞的多能狀態
日期：2011-05-09 08:31:16
胚胎干細胞具備分化成多種細胞類型的潛能，并被普遍認為有著重要的醫療前景。干細胞培養的質量決定了它有效產生分化細胞類型的能力，這可以通過對多能表型的分子標記的表達進行分析來測定。早期譜系限制性細胞的標記也能用于確定在干細胞培養物中是否存在分化的細胞，并能表明分化細胞所代表的譜系通路。
R&D Systems提供的人類多能干細胞評估引物對（圖1），可用于檢測評估14種基因的mRNA轉錄本。這14種基因經常作為未分化細胞和早期譜系限制性人胚胎干細胞的分子鑒定標記。該產品還包含人類GAPDH的引物對，可作為對照用于驗證cDNA合成是否成功。此外產品還包含了一個陽性對照。另外，R&D Systems還提供了這個試劑盒的小鼠/大鼠版本。
R&D Systems還提供其他試劑來評估干細胞表型。例如，通過流式細胞儀來檢測未分化的NTera2人畸胎癌細胞中Oct 3/4的表達（圖2），通過免疫細胞化學來檢測小鼠D3胚胎干細胞核中DPPA4的表達（圖3）。
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分析物 | ||
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1. DNA marker 2. Negative control 3. DPPA5/ESG1 4. Nanog 5. Oct3/4 6. SOX2 7. Nestin |
8. Otx2 9. TP63 10. AFP 11. GATA-4 12. PDX-1 13. SOX17 14. HNF-3 beta |
15. Brachyury 16. Stella 17. GAPDH 18. Positive control 19. DNA marker |
圖1. 用干細胞多能和譜系限制的14種不同分子標記的引物對進行擴增，PCR產物進行凝膠電泳。用于擴增的cDNA來源于多種胚胎組織。條帶3-6的標記表達于未分化的胚胎干細胞，條帶6-9是外胚層譜系，條帶10-14是內胚層譜系，條帶15是中胚層譜系，條帶16包含生殖細胞的標記。1，2.17-19條帶都是對照。
圖2. 通過流式細胞儀對NTera2細胞中Oct3/4的表達進行評估。用大鼠抗人/小鼠的Oct3/3單克隆抗體（橙色）或同型對照（灰色）作為一抗，接著使用APC結合的二抗。
圖3. 利用 R&D Systems的抗小鼠DPPA4多克隆抗體和 R&D Systems Northern Lights™ 557結合的二抗來檢測D3細胞核中的DPPA4。
此外，R&D Systems還提供了間充質干細胞功能鑒定試劑盒。它能根據小鼠BMSC/MSC分化成多種間充質細胞的能力從而鑒定它們。這個試劑盒包含了特殊配方的培養基補劑，能有效誘導BMSC/MSC分化成脂肪生成細胞、軟骨形成細胞或成骨細胞。試劑盒中還包含了一組抗體，包括羊抗小鼠的FABP4，羊抗小鼠的膠原蛋白II，以及羊抗小鼠的骨橋素，用于評估成熟細胞的表型。
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