實驗室蛋白常用試劑配方
日期：2011-01-29 13:20:55
1、PBS:
取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸餾水中，混勻，測pH值應在7.2~7.4之間，若偏離此范圍，請用0.1N的HCL或NaOH調整。
2、TBS：
2.1 Tris緩沖液配方：（0.5 M pH7.6）
Tris（三羥甲基氨基甲烷） 60.57g
1N HCL 約420ml
雙蒸水 加至1000ml
Tris緩沖液配制方法：
先以少量雙蒸水（300~500ml）溶解Tris，加入HCl后，用HCl（1N）或NaOH（1N）將pH調至7.6， 最后雙蒸水加至1000ml。此液為儲備液，4℃冰箱中保存。
2.2 TBS配方：
Tris-HCI緩沖液（0.5M pH7.6） 100ml
NaCI 8.5~9g (0.15mol/L)
雙蒸水 加至1000ml
TBS配制方法：
先以少量雙蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl緩沖液，最后加雙蒸水至1000ml，充分搖勻。
3、枸櫞酸鹽緩沖液（Citrate buffer）：
3.1 儲存液：
A. 0.1M枸櫞酸溶液：稱取21.01g枸櫞酸（C6H8O7·H20）溶于1000ml蒸餾水中。
B. 0.1M枸櫞酸鈉溶液：稱取29.41g枸櫞酸鈉（C6H5Na3O7·2H20）溶于1000ml蒸餾水中。
3.2 工作液：
取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸餾水中，溶液pH值應為6.0 0.1
4、胰酶（Trypsin）：
4.1 ZLI-9011胰蛋白酶消化液：
常用濃度為0.125%，即使用前將一滴試劑1胰酶溶液和三滴試劑2胰酶稀釋液均勻混合（1:3稀釋），則可直接滴加使用。胰酶的最終濃度可以根據使用者的要求進行調整，濃度范圍可以從0.05%（1:10稀釋）至0.25%（1:1稀釋）。
4.2 ZLI-9010胰蛋白酶：
取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或
0.1% pH7.8的無水氯化鈣水溶液中，溶解即可。
5、胃酶（Pepsin）：
4%胃蛋白酶，用0.1mol/L HCL配制。
6、DAB：
6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit：
使用前只需將試劑盒提供的A、B、C三種試劑各一滴加至1ml雙蒸水中，即可獲得1ml DAB工作液，簡單易用。
6.1 ZLI-9030 DAB：
6mgDAB溶于10mlTBS（0.05M pH7.6），再加入0.1ml濃度為3％的H2O2，過濾掉沉淀物，即可。
7、AEC：
4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml濃度為0.1M的醋酸緩沖液（pH5.2），然后加入0.15ml 3%H2O2，過濾掉沉淀物。
8、RIPA：
1×PBS，1%NP 40，0.5 sodium deoxycholate，0.1% SDS（此液體可長期保存）。以下抑制劑以儲存液方式保存，臨用前加入RIPA中。
8.1 10mg/ml PMSF異丙醇溶液（用量為10 l/ml）
8.2 Aprotinin（Sigma產品，用量為30 l/ml）
8.3 1000mM sodium orthovanadate冷凍液
（用量為10 l/ml）
9、Blotto A：
常規使用1×PBS，5% milk，0.05% Tween 20。
10、Blotto B：
與Phosphotyrosine抗體共用，1×PBS，1% milk，0.05% Tween 20。部分實驗中milk可完全去除，但可能引起背景增高。
上一篇： 日本禽流感疫情蔓延
下一篇： 蝸牛擁有奇特熒光色彩外殼 能點亮身體
