一種可用于多重連接依賴的擴增技術的長探針的制備方法
日期：2010-08-13 16:22:26
背景：2002年荷蘭科學家發明了一種名為多重連接依賴的擴增技術（muitiplex ligation-dependent probe amplication,MLPA）的高通量基因檢測方法，可在同一反應管內對多達45種不同的核苷酸序列進行檢測和定量分析。至今，MLPA技術已應用于很多領域，如單核苷酸多態性和基因突變檢測、基因片段缺失和重復、染色體數目異常、基因甲基化檢測及mRNA分析等等。在該方法中涉及到長探針和短探針，其中長探針的制備是難點。
方法改進：采用PCR方法結合親和素磁珠法制備（long oligonucleotide preparation by magenetic-beads，LOPM）可用于多重連接依賴的擴增技術的長探針。通過針對目標序列和用于制備長探針的與待檢測靶片段無關的模板UT（Unrelated Template，UT），如質粒等設計進行PCR擴增的引物，其中的一個引物標記進行生物素標記，以質粒為模板進行PCR擴增，獲得特異長度的生物素標記的核酸序列，利用親和素磁珠進行純化，最終制備長度特異的單鏈寡核苷酸（非生物素標記）。利用親和素磁珠法制備MLPA長探針的方法如圖1。
結果：采用PCR方法結合親和素磁珠法制備可用于多重連接擴增技術的長探針能根據實驗需求制備任意長度的長探針，不僅大大降低了探針設計的難度，同時避免了噬菌體培養和雙酶切等耗時長、成本高等復雜的操作過程，使得普通的實驗室也能順利進行MLPA檢測實驗。
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