快速純化大量RNA的新方法
日期：2010-05-11 16:04:45
RNA的結構學研究，比如X射線晶體衍射或者核磁共振（NMR），都需要制備毫克級的高純度RNA。
RNA的大量合成一般是利用T7 RNA聚合酶對DNA模板進行體外轉錄，不過隨后的純化非常困難且耗時。利用高速液相層析系統（FPLC）的分子排阻層析能夠從RNA產物中有效去除未摻入的NTP、中斷的小轉錄本及模板DNA，但是需要多個準備步驟，如酚/氯仿抽提，以去除T7 RNA聚合酶，以及脫鹽和樣品濃縮。
英國劍橋醫學研究委員會分子生物學實驗室的Laura Easton等開發出一種快速、大規模純化結構上均一的RNA的新方法。這種方法利用的是弱陰離子交換層析，它省略了上述這些繁瑣的步驟，更快速地純化大量RNA。文章發表在《RNA》雜志上。
整個過程如下：利用T7 RNA聚合酶對線性的質粒DNA進行轉錄之后，加入EDTA終止反應，并直接上樣到DEAE-Sepharose FPLC柱上。最初的流出液含有T7 RNA聚合酶及rNTP。之后一次洗脫出短的中斷轉錄本、期望得到的RNA和質粒DNA。RNA的純度和均一性由分子排阻層析來驗證，而蛋白凝膠電泳證實了純化的RNA中不含T7 RNA聚合酶。
利用這種新方法，研究人員能夠在4小時內純化長度在30-500 nt的體外轉錄RNA，RNA的回收率達90%以上。如果單體RNA和低聚RNA有著足夠的電荷差異，那么也能將兩者區分開。
此技術既排除了酚/氯仿抽提，也不需要對RNA變性，不僅簡單省時，還能省錢。因為同位素標記的rNTP能夠很輕松地從柱流出液中回收利用，這樣又能節省一筆費用。
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