Nature Methods發布CRISPR新技術：CRISPR-X
日期：2016-11-02 09:20:46
斯坦福大學遺傳學系，藥理學系的幾位學者合作，開發出了一種為原位蛋白質工程重利用體細胞超突變的新技術—— CRISPR-X ，這將能幫助科學家們創建復雜的原始遺傳突變文庫，分析完善蛋白質工程。
這一研究成果在線公布在10月31日的Nature Methods雜志上，文章的通訊作者是斯坦福大學Michael C Bassik副教授，他曾參與研發多項CRISPR新技術，比如前年研發的SunTag，這是一套分子掛鉤，其能夠將多個拷貝的生物活性分子掛到可用來靶向一些基因或其他的分子的蛋白質支架上，利用SunTag能增加CRISPR的變化。
目前通過定向進化法分析蛋白功能，進行蛋白質工程研究受限于整體誘變，或DNA文庫構建方面的技術問題。這篇文章針對于此，研發出了一種為原位蛋白質工程重利用體細胞超突變的新技術：CRISPR-X。
研究人員催化激活休眠的 dCas9，令其召集攜帶MS2修飾sgRNAs的胞嘧啶脫氨酶(cytidine deaminase，AID)突變，從而能特異化誘變內源靶標（限制脫靶傷害）。這樣就能生成多個不同的點突變文庫，同時靶向多個基因組位點。
為了驗證這種方法，研究人員誘變了GFP，篩選了光譜轉移突變，比如EGFP，而且他們還突變了癌癥治療藥物萬珂（Bortezomib）的靶標——PSMB5，Bortezomib是目前批準上市的唯一治療惡性腫瘤的蛋白酶體抑制劑，能特異性抑制哺乳動物細胞內26S蛋白酶體的類胰凝乳蛋白酶。
結果他們從中找到了引發Bortezomib耐藥性的已知和全新的突變。同時研究人員還利用超活化AID突變，誘變了其轉錄起始位點上游和下游的位點。
這些研究均表明 CRISPR-X 是一種強大的工具，能幫助科學家們創建復雜的原始遺傳突變文庫，分析完善蛋白質工程。
中科院上海生命科學院/上海交大醫學院健康科學研究所的研究團隊十月十日在Nature Methods雜志上發表了一項重要研究成果。他們將活化誘導胞嘧啶核苷脫氨酶（AID）與CRISPR-dCas9融合起來，打造了有效的遺傳多樣化工具，以便對功能性變異進行高通量篩選。
哈佛大學的科學家們以CRISPR為基礎打造出了一個定向的RNA定位法——CRISPR-Display（CRISP-Disp）。他們利用失去催化活性的dCas9，將整合在sgRNA中的大片段RNA帶到特定DNA位點。這個研究RNA功能的強大工具發表在Nature Methods雜志上，文章通訊作者是RNA領域的著名青年科學家John Rinn博士，他曾被評為2009年美國國內撼動科學界的青年英才。
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