替代PCR，RPA在癌癥研究中的應用
日期：2014-11-03 09:03:46
重組酶聚合酶擴增RPA被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術。RPA擴增的速度非?？?，靈敏度高，對硬件設備要求低，而且不需要復雜的樣本處理。這樣的技術特別適合于體外診斷、獸醫、食品安全、生物防御、農業等領域。自人類對癌癥“宣戰”以來已經過去了四十多年，這種惡性疾病仍舊是一團揮之不去的陰影。統計數據表明，2012年世界上有15%的死亡是癌癥造成的。隨著發展中國家逐漸接納西方國家的飲食和生活方式，這一數字在未來幾十年中肯定還會上升，這無疑給發展中國家敲響了警鐘。
RPA用于癌癥突變檢測
新加坡A*STAR的研究團隊去年六月在Lab on a Chip雜志上，發表了一種能夠快速檢測癌癥單點突變的新技術，等溫固相擴增/檢測（ISAD）。這是一種無需標記的實時檢測技術，將基于硅基微環（silicon microring）的固相擴增與等溫重組酶聚合酶擴增（RPA）結合在一起。
在這項研究中，ISAD主要用于檢測HRAS（Harvey RAS）基因的單點突變。在固相擴增階段，引物直接連在設備的表面。在擴增過程中，硅基微環諧振器會發生光的波長漂移，在此基礎上就能對擴增DNA進行檢測，不需要任何標記。
研究顯示，與RPA和傳統PCR方法相比，ISAD技術的靈敏度要高一百倍。這個技術能夠在擴增過程中區分HRAS基因的一個單點突變。由此可見，ISAD能夠用于突變、單核苷段多態性和癌癥指標的檢測。
RPA用于抗癌藥物篩選
去年十月，Talanta雜志上也發表了一項用到RPA技術的癌癥研究。該研究在超靈敏生物條碼分析（BBC）、適配體（aptamer）和RPA的基礎上，開發了一個檢測細胞色素C（Cyto-c）的新生物條碼分析法（ABC）。細胞色素C是細胞死亡的重要標志物。
適配體是一種單鏈短DNA，它折疊形成的3D結構能夠結合特定的目標分子，具有高親和力和特異性。
研究人員在BBC分析的基礎上進行優化，采用了Cyto-c特異性的適配子，并用等溫重組酶聚合酶擴增（RPA）替代了耗時長的PCR。研究顯示，ABC分析的檢出限低至10 ng/mL，而且可以在三小時內完成。研究人員用ABC方法對一些潛在的抗癌藥物進行了體外測試，檢驗了它們對不耐藥和多重耐藥性肝癌的殺傷效果。
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